154055. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készítmény aldoláz meghatározására
154055 rendszer redukciója az aldoláz-aktivitásnak megfelelőien -megy végbe. Az aldoliázHaktiivitás látható fényhullámhossz tartományban, optikai segédeszközök nélkül való pontos megíhatáinozásának lehetőségével nyílik mód arra is, (hogy az alkalmazási területet, főként az orvosi gyakorlatiban kiterjesszük. A találmány szerinti meghatározási módszer egyszerű eszközeivel alkalmas arra, hogy járványok esetében a helyszínen szűrővizsgálatként legyen alkalmazható, továbbá az ambuláns, valamint állandó orvosi diagnosztikai fontos eszközévé váljon. A vizsgálati módszer egyszerűsége és gyorsasága folytán az egyszerű gyakorló orvos számára is lehetővé vélik az aldoláz-aktivitás meghatározása. Ez utóbbi ismeretes módon nagy szerepet játszik a szívinfarktus és hepatitis1 diagnosztikájáiban. Többfajta betegság ambuláns ellenőrző vizsgálata, valamint kisebb kórházak esettén is a találmány szerinti módszer jelentős segítséget nyújt az orvosi diagnosztikában. Az, alábbi gyakorlati kiviteli példák kapcsán részletesen ismertetjük az aldoláz-meghatározás kiviteliét, a diagnosztikai készítmény összetételét és alkialmazásímódját. i. példa Az aldoláz meghatározásra az alábbi összetételű készítmény alkalmas: 1. oldat 0,1 mólos trietanolamin puffer, pH=7,4 1,5-10-4 mólos nikotinsavadenin-dinukleotid 0,0025% diklórfenolindofenoi 3-10-3 mólos arzenátoldat, pH = 7,4 2. oldat 0,1% fenazinmetoszulfát 3. oldat 0,1 mólos fruktóz-l,6-d'ifoszfát, pH=7,4 4. oldat 6 mg/ml. kristályos glioerinaldcihid-foszfát dehidrogenáz 5. oldat 0,1 mólos trietanolaiminpuffer, pH=7,4 A fenti oldatok hűtőszekrényben és sötét helyen 'külön-külön 7 napig tárolásállóalk. 2. példa 10 15 20 35 40 45 50 55 Szokásos hordozóanyagot, mint papírt vagy szálas anyagot az 1. példa szerinti reagensekkel 60 átitatunk és liofil módszerrel szárítunk. Az öszszehasonlító indükátorcsílk fruktóz-l,6^difoszfátot nem, tartalmaz, ezenkívül az 1. példában megadott diklórfenolindofenolHkonioentrációmak csupán háromnegyedét tartalmazza. 65 3. példa A vizsgálat elvégzése céljából az 1. példa szerinti oldatokat az alábbi táblázatból kivehető adatok szerint keverjük össze: Alapkeverék az aldoláz meghatározáshoz: Próbacső A B 1. oldat 1,60 ml 1,20 ml 2. oldat 0,04 ml 0,04 ml 3. oldat 0,20 ml — 4. oldat 0,05 ml 0,05 ml 5. oldat — 0,60 ml Ezzel egyidejűleg a vizsgálandó anyagot is az A és B prábacsőbe hlyezzüfc és az oldatokat fotometriás vagy vizuális úton összehasonlítjuk. Abból a óéiból, hogy nem enzimatikus jellegű redukáló anyag hatását a mérési eredményekből kiiktassuk, minden esetben külön vakpróbát is végzünk. Az enzimaktivitás mértékét azáltal határozzuk meg, hogy mérjük laz időkülönbséget a kísérleti anyag hozzáadása és a két piróbacső, ill. indikátorcsík színegyenlősége között. A vakpróba és a kísérleti keverék közötti színkülönbség megfelelő kiválasztásával egy meghatározott tartomiányban a módszer pontossága az aldoláz kimutatására annyira megnövelhető, hogy ez kétszerte érzékenyebb lesz (hilba ± 0,5 nemzeitközi egység), mint az eddig alkalmazott módszerek esetében. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás ^az andoláznaktivitás meghatározására, az emberi és- állati szervezet extra- és intracelluláris folyadékában azzal jellemezve, hogy az aldoláz-aktivitás folytán képződő foszfoglioeritnaldehidet a foszfognoerinaldehid^dehidrogenáz segédenzim felhasználásával arzenát jelenlétében oxidáljuk és az így kapott redukált nikotinsav-adenin-dinukleotidet fenazinmetoszulfát'ból és diklórfenolindofenolból álló színeziékrendszerhez kapcsoljuk. 2. Készítmény az 1. igénypont szerinti aldoláz-aktivitás meghatározására, azzal jellemezve, hogy a nikotinsavadenin-dinuíkletotidból, diklórfenolmdofenclböl, aikáliarzenátlból, fenazinimetoszu3ífátbó<l, gMcerinaldelndfoszfátdehidrogenázból, 7,0—6,5 pH-értékű trietanolaminpufferból és fruktóz-l,6-difoszfátból áll,. 3. A 2, igénypont szerinti készítmény kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a reagenseket a megfelelő oldatokban a következő komcentrációtartományban alkalmazzuk: 1. oldat 1—0,001 mólos trietanolamin 10~2—10~5 mólos nikotinsavadenindinukleotid diklórfenolindifenol 1Q~J —10~~ 4 mólos alkáliarzenát 2;
