153885. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növényi betegségeket megelőző új készítmények előállítására
3 mycint termel és aureothricin termelésétől mentes. Az egyik mutáns törzset A. T. C. C. 15715 szám alatt deponálták. Kasugamycint tartalmazó fermentlevet úgy állítanak elő, hogy a kasugamycint termelő élő szervezet spóráját vagy micéliumát megfelelő táptalajra oltják, majd a fermentációt levegő jelenlétében lefolytatják. Táptalajként pl. a következő összetételek használhatók: Maltóz 3,0 % szójaiiszt 2,5 % nátriumkioríd 0,3 % KH2 P0 4 0,1 % MgS04 7H 2 0 0,Qí '»% Maltázzai hidroli zált keni; íny •ítő 5,0 Többi komponensek, mint A példában. Szójaolaj 2,0 % szójaiiszt 2,5 % nátriumkioríd 0,3 !/o K2 HP0 4 0,1 v7() MgS04 7H,0 0,0c >% A kasugamycin termelése lehetővé válik akkor is, ha a táptalaj szénforrásaként glukózt, glicerint, keményítőt stb. nitrogénforrásként pedig peptont, húskivonatot, hallisztet, földimogyorólisztet, gyapotmaglisztet stb. tartalmaz. A fermentációt 25—35 C° közötti hőmérséklettartományban aerob körülmények között addig folytatják, amíg kasugamycin kellő mennyiségben képződik. A fermentleben található kasugamycin rendkívül nehezen extrahálható szerves oldószerekkel, mint pl. butanollal, butilaeetáttal, etilacetáttal stb. Mivel a kasugamycinnek kellő stabilitása van, így ha a fermcntlében kellő mennyiségben felgyülemlett, akkor a fermentlevet csökkentett nyomáson bepárolják vagy porlasztó szárításnak vetik alá. A bepárlás vagy porlasztó szárítás során olyan anyag képződik, amely növényi betegségek kezelésére önmagában is felhasználható. A fermentléből a kasugamycin szulfonsavas kationcserélő gyanta segítségével adszorpció útján kinyerhető. Megfelelő műgyantaként pl. ÍR—120, Lewatit—SP—100, Amberlite XE—100 használható. A műgyantákat vagy hidrogénciklusban vagy ammóniumsók formájában alkalmazzák. A műgyantán adszorbeált kasugamycint savval vagy célszerűen vizes ammónia oldattal eluálják. Az eluált oldatot semlegesítik és csökkentett nyomáson bepárolják. Ha a fermentleben kellő mennyiségű kasugamycin felgyülemlett, akkor a feldolgozás célszerűen lefolytatható oly módon, hogy az aktív frakciót csökkentett nyomáson bepárolják és kasugamycin-hidrogénkloridot kristályos formában kinyerik. Az ebben a műveleti lépésben nyert anyag mezőgazdasági hasznosítás szempontjából kellő tisztasággal rendelkezik. A hidrogénkloridsón kívül szulfátsók is előállíthatók. A szulfátsó előállítása céljából az eluált oldatot, amely vizes ammónia, kénsavval semlegesítik és csökkentett nyomáson bepárolják. A nyerstermék tökéletes tisztítása során a nyersterméket vízben feloldják és aktív szénen kromatografalják. Az eluálást ilyen esetben híg sósavval végzik. A hatóanyagot tartalmazó frakciót be-5 töményítik és a maradékot vízből vagy víz-etanol-elegyből átkristályosítják. A kasugamycin hidrogénkloridsója könnyen előállítható kristályos állapotban, míg a szulfátsója amorf. A kasugamycin színtelen termék, hidrogén-10 kloridsója pedig fehér kristályos anyag. A hidrogénkloridsó 202—204 C°-on elbomlik. A hidrogénkloridsó vízben könnyen oldódik, metanolban csaknem oldhatatlan, oldhatatlan továbbá etanolban, acetonban, etiiacetátban, kloroform-15 ban és benzolban. A hidrogénkloridsó kristályainak maximális oldhatósága 1 g anyag 8 ml vízben. A kasugamycin szulfátsó ja amorf állapotban jobb vízoldhatósággal rendelkezik, mint a hidrogénkloridsó. 220—400 mu ibolyántúli hul-20 lámhossztartományban abszorpciós maximumot nem mutat. Fajlagos optikai forgatóképessége [alfa]12!) = +120° (1,6% vízben). A termék gyengén bázisos jellegű, pK'a = 7,1. A termék molekulasúlya gőznyomás-ozmózisos módszerrel sr> 449, titráiási módszerrel 453. Az elemi analízis és a kristályvíz meghatározása alapján a kasugamycin hidrogénkloridsó jának összeg képlete:' C5H27O10N3.HCl.H9O.' Számított értékek: C: 38,91%, H: S.51%, N: 9,03%, O: 37,34%, £0 Cl: 7,66%. Talált értékek: C: 33,58%, 38,34%, H: 6,94%, 6,62%. N: 9,66%- 9,0404, O: 37.05%, 37,54%, Cl: 8,16%, 8,39%. A hidrogénbromidsó elemi analízise a következő: összeg képlet: Cj5H27OjoN3.HBr.H2O. Számított értékek: C: £5 35,44%, H: 5,95%, N: 8,27%, O: 34.62%. Br: 15,72%. Talált értékek: C: 35,27%, H: 6,00%, N: 8,48%, O: 33,31%, Br: 16,94%. A hidrogénbromidsó és a szulfátsó vízoldható. A hidrogénkloridsó nukeláris mágneses rezonancia spekt-40 rumát D20 oldatban vizsgálták, összehasonlító' mintaként 3-(trimetilszilil)-propánszulfonsavas nátriumsót felhasználva és Varian 60 készülékben vizsgálva a következő ppm értékeken mutat sávot: 1,22, 1,32, 2,25, 2,35, 2,42, 2,50, 3,55, 45 3,79, 4,05, 4,38, 4,50, 4,70, 5,32, 5,35. A ninhidrin-reakció piridin és perjodát-permanganát felhasználása esetén pozitív, míg a Seliwanhoff-, Sakaguchi-, ferriklorid- és Fehling-reakció negatív. Szokásos körülmények között az anth-50 ron és Elsőn—Morgan-reakciók is negatívnak bizonyultak. Az anthron-reakció salétromsavval való kezelés után vöröses-barna színeződést mutat. 25 : 75 : 900 arányú HCOOH—CH3 COOH— —H2 0 rendszerrel, 1,8 pH-értéken, 10 C°-on 55 3000 V/40 cm feszültséggel és 15—20 mA/10 cm áramerősséggel 15 percig végzett nagyfeszültségű elektroforézis esetén 3,7 cm értékű vándorlás tapasztalható az anód irányában. A Toyo-51A jelű szűrőpapírral végzett papírkromatog-60 rafiás vizsgálatok során 2:1:1 arányú butanol-ecetsav-víz rendszerrel Rf értéke 0,28, 4:1: : 4,9 : 0,1 arányú butanol-etanol-víz-ammónia rendszerrel Rf értéke 0,007, végül 6,3 :1 : 2,7 arányú butanol-ecetsav-víz rendszerrel Rf ér-65 léke 0,06. 2
