153833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prothrombin kinyerésére vérplazmából
153833 6 prothrombin-tartalom — a kiindulási plazma 100%-os értékéhez viszonyítva — kisebb, mint 5%, az adszorpció hatásfoka tehát nagyobb, mint 95%.) Az adszorbens felületén megkötött prothrombin mellől az egyéb plazmafehérjéket a következő 10—10 perc időtartamú, szobahőmérsékleten végzett mosásokkal távolítjuk el: 1. 200 ml 2%0 nátrium-oxalátot tartalmazó 0,9%-os nátrium-klorid; 2. 200 ml 2%fl nátrium-oxalátot tartalmazó 9,0%-os nátriumklorid; 3. 400 ml desztillált víz és 4. 50 ml 0,005 mólos nátrium-citrát. A mosó folyadékokat centrifugálássai különítjük el a csapadéktól, végül a prothrombin leoldását 50 ml 0,10 mólos nátrium-citrát-oldattal 30 perc időtartamú kevertetés mellett végezzük. A leoldott és az adszorbenstől elkülönített prothrombin oldatot 0 — +4 C° hőmérsékletre hűtjük, majd az ekkor kiváló és kiülepedő szennyező anyagokat centrifugálássai eltávolítjuk s a hűtött oldatból kétszeres térfogatú hideg acetonnal csapjuk ki a a prothrombint. Az oldatot centrifugáljuk, majd a csapadékot 20—30 mi desztillált vízben oldjuk és váltott deszt. vízzel szemben dializáljuk 3—5 órán át a citrát-ionok eltávolítása céljából. Dialízis után az oldatot tükrösre szűrjük, lehűtjük 0 C°-ra és —10 C° hőmérsékletű, 1,5-szeres térfogatú acetonnal kicsapjuk a végterméket, majd centrifugálássai elkülönítjük, végül abszolút acetonnal megszárítjuk. Súlya: 50 mg, hatóértéke 80 NIH U mg fehérje; kitermelés: 4400 NIH U/liter plazma. 2. példa: 5 liter 2%o nátrium-oxalátot tartalmazó, +4 C°-ra hűtött marhaplazmához 2,5 liter ugyanilyen hőmérsékletű 2,5%-os nátrium-oxalát oldatot öntünk, majd állandó keverés közben 1,2 liter 10%-os báriumklorid oldatot csurgatunk hozzá vékony sugárban. Egy órai keverés után a prothrombint megkötve tartalmazó bárium-oxalát csapadékot ülepedni hagyjuk, majd a fölöttes plazma leszívatása után centrifugálássai különítjük el a plazmától. (A plazma fölöttesében Quick szerint mért prothrombin-tartalom kisebb 1%-nál, az adszorpció hatásfoka tehát nagyobb 99%-nál. '(A csapadékot a prothrombin visszanyerése előtt sorrendben a következő oldatokkal mossuk az egyéb plazmafehérjék eltávolítása céljából: 1. 1000 ml 2%0 nátrium-oxalátot tartalmazó 0,9%-os nátrium-klorid; 2. 1000 ml 2%0 nátrium-oxalátot tartalmazó 9,0%-os nátrium-klorid; 3. 1000 ml desztillált víz; 4. 250 ml 0,05 ml 0,05 mólos nátrium-citrát oldat. Az egyes mosásokat szobahőmérsékleten végezzük és a mosóleveket centrifugálássai különítjük el a csapadéktól. A prothrombinnak az adszorbensről való leoldását 250 ml 0,50 mólos nátriumcitrát oldattal végezzük szobahőmérsékleten, 60 perces kevertetéssel; az eluátumot centrifugálássai különítjük el a csapadéktól, majd 0 5 5 C°-ra hűtjük s az éjszakán át kiváló szennyező anyagokat eltávolítjuk. A hűtött oldatból a prothrombint 2-szeres térfogatú —10 C°-ra hűtött acetonnal csapjuk ki, a csapadékot 150—200 ml deszt. vízben oldjuk és váltott deszt. vízzel 10 szemben dializáljuk. 8 órás dialízis után a prothrombin tartalmú belső folyadékot vákuumban alacsony hőmérsékleten térfogatának 1/5—1/10-ére bepároljuk, majd szűrés után hűtjük és belőle a prothrombint —10 C° hőmérsékletű 15 acetonnal kicsapjuk és megszárítjuk. A végtermék súlya 220 mg, hatóértéke 200 NIH U/mg, kitermelés 9600 NIH U/liter marhaplazma. Szabadalmi igénypontok: 20 1. Eljárás prothrombin előállítására az alvadásban oxalát-ionokkal meggátolt vérplazmából, azzal jellemezve, hogy a vérplazmához kétértékű kationok olyan vízoldékony sóit adjuk, 25 amelyek az oxalát-ionokkal 10_3 -nál kisebb oldhatósági szorzatú sót képeznek, az így létrehozott csapadékot az általa megkötött prothrombinnal együtt a plazmától elkülönítjük, majd ismert módon mossuk, a prothrombint a mosott S0 csapadékról leoldjuk és oldatából izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a vérplazma oxalát-ionkoncentrációját a vízben 10~3 -nál kisebb oldhatósági szorzatú oxalátsó képzését meg-35 előzően 0,05—0,20 mól/liter, célszerűen 0,06— 0,16 mól/ liter koncentrációhatárok közé állítjuk be oxálsav és dinátrium- vagy dikálium-oxalát alkalmazásával. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás 40 foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az oxalát-ionokkal 10~3 -nál kisebb oldhatósági szorzatú sót képező kationokként a vérplazmához cink-, kadmium-, stroncium-, mangán- vagy bárium-ionokat adagolunk, célszerűen 5—10%-os 45 klorid- vagy nitrát-oldat alakjában. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az oxalát-ionokkal 10~3 -nál kisebb oldhatósági szorzatú sók képzését —5 C° és +24 50 C° közötti hőmérsékleten és 6,0 és 8,50 közötti pH-tartományban végezzük. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az oxalát-ionokkal 10_3 -nál kisebb old-55 hatósági szorzatú sót képező kationokat a plazmában levő oxalát-ionok kicsapásához szükséges vagy annál nagyobb koncentrációban adjuk a plazmához. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6707790. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
