153739. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubmerz Claviceps tenyészetek alkaloid termelésének fokozására

153739 A kapott érték: kontroll: 4. példa: 2400 gamma/ml, 185 gamma/mi. Parazita körülmények között ergotamint termelő Claviceps purpurea törzs rázott tenyészetét agárral szilárdított I. táptalajra szélesztjük, 3 bét után a szűrt UV fényben fluoreszkáló telepeket levesszük és 100 ml I. táptalajra oltjuk. 10 nap után egy jólnövő tenyészettel homogenizálás után két újabb rázólombikot oltunk 100 ml I. táptalaj az alábbi adalékkal: NaCl 2,4%, ozmózisos nyomás 7,7 átmos kontroll 100 ml I. táptalaj. 10 napos rázatás után az 1. példa szerinti alkaloidmérés eredménye 70 gamma/ml, míg a kontrollfermentáció szerint a tenyészet negatív. 5. példa: Paspalum distichum-ról származó szklerociumból egy felületileg sterilezett darabkát agárra helyezünk. A kifejlődött gombatenyészetet lekaparjuk és 100 ml I. táptalajra oltjuk. 8 napos rázatás után a tenyészetet homogenizáljuk és 10—10 ml-rel az alábbi táptalajsort oltjuk: a) I. táptalaj b) I. táptalaj +1% KN03 c) I. táptalaj 2% KNO, d) I. táptalaj 3% KNOs e) I. táptalaj 4% KN03 f) I. táptalaj 5% KN03 A tenyészeteket 8 napon át 24° C-on rázatjuk, majd a 3. példában leírt módon az alkaloidtartalmat meghatározzuk. Alkaloidértéket csak a c) és d) táptalajoknál kapunk. A d) lombikból ismételt oltást végzünk 100 ml I. táptalajra. Adalék: KN03

3%, ozmózisos nyomás 14,4 atm. A nyolc naponként ismételt átoltási sor 4. passzázsában a kapott alkaloidérték 420 gamma/ml, kvantitatív papírkromatográfiás vizsgálat szerint a termék megoszlása: 30% ergometrin, 5% metrinin, 8% agroklavin, 10%, elimoklavin, 30% kannoklavin, 17% egyéb 6. példa: Ix 13—26 törzs malátaagar tenyészetével 10 db 200 ml I. táptalajt tartalmazó rázólombi-5 kot oltunk. Nyolc napi 24° C-os rázatás után a tenyészetek 400—400 ml-ével oltunk 5 db 6 literes fermentort, mely 2% NaCl-al kiegészített I. táptalajt tartalmaz. 10 220-as fordulat, liter/liter levegőtérfogat és 24° C mellett 7 napon át fermentálunk, majd 25 1 tenyészetet egyesítve oltunk 600 liter hasznos térfogatú saválló üzemi fémfermentorban 400 liter I. táptalajt. A fermentációt 15 4 napig folytatjuk. A 4 napos tenyészet pH-ja 4,6—4,8, szárazsúlya 1,0—1,2%, Alkaloidtartalma 80—120 gamma/ml. A tenyészet 300 literével oltunk 3 m3

hasznos térfogatú saválló fémfermentorban 3000 20 liter I. táptalajt, adalék: NaCl 2,0%, ozmózisos nyomás 6,4 atm. A fermentációt 0,5—1,0 liter/táptalajtérfogat/ 25 perc levegő átáramoltatása mellett 200—300 fordulatszámú keveréssel 25 C°-on, időnkénti habgátló adagolással 10 napig folytatjuk. Ossz. alkaloidaszint 520 gamma/ml. Leálláskor az alkaloidot a szokásos módon £0 nyerjük ki. A kapott nyeredék: 80 mg liter ergotoxin bázis 105 mg/liter ergometrin maleát 35 20 mg/liter kannoklavin 15 mg/liter vegyes klavintípusú alkaloidok. 40 45 50 Szabadalmi igénypontok: vízoldékony alkaloid. 1. Eljárás alámerülő kultúrában tenyésztett Claviceps-törzsek alkaloidtermelésének fokozására, amelyre jellemző, hogy a rázott, vagy levegőztetés mellett kevert tenyészet, ill. fermentáció táptalajához a táptalaj ozmózisos nyomását 2—25 atm-val növelő adalékot, mint szervetlen vagy szerves sókat, mono-, vagy diszacharidot adunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az adalékanyagot az 1. igénypont szerinti koncentráció-határokon belül oly mennyiségben alkalmazzuk, mely a gomba növekedését még nem gátolja, de morfológiáját megváltoztatja. 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás ki-55 viteli módja, melyre jellemző, hogy az adalékanyag beadását a fermentáció közben végezzük, vagy ismételjük. 4. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az adalékanyagot a törzsfenntartás, vagy az előtenyésztés során alkalmazzuk. 60 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6707592. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23. 4