153247. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidet tisztítással egybekötött kinyerésére állati szevkivonatokból
153247 bentonitot adunk és 1 órán át kevertetjük, ihajid az adszorbens leülepedése uitán az alkoholos felülúszó nagy részéit leszívatjufc, az adszorbenst szűrjük és kevés vízzel átmossuk. Ezután 1,5 liter In HCL-* taritaimazó 50%-oß eta- 5 noHal két részletben eluálj.uk az aktív polipeptidleket. Az eluátuimot 4n etanoJos KOH-val semlegösítjük, a kivált csapadekot, amely a szenynyező anyagok egy részét tartalmazza, kiszűrjiük, majd a semleges oldatból az etanolt; vá- 10 kuumJban ledeszttilláljuik. A vizes olldiat 2:5 TIE ós 6 200 000 KIE aktivitást tartalmaz, tisztasága 3,1 TIE/g fehérje. 3. példa: 15 10 kg marha-pankreászból készült.30 1 semleges vizes kivonathoz, amely 4,950,000 KIE-t és 20 TIE-Jt tartalmaz, 2:25 • g derítőföldet adunk, 2 órán át keverjük, a derítőföldről előzetes üfc- 20 pítés után az aktív polipeptideket már nem tartalmaaó oldat nagy részét leszívaltjulk, a derítőíföldet szűrjük, 1 liter 0,01n H2 S0 4 -oldiattal átmossuk, majd 0,2n H2 S04-et tartalmazó 70%os metanollal három részletben, összesen 1500 25 ml-rel leoldjuk az aktív polipeptideket. Az öszszegyűjtött eluátum pH-ját GaO—víz 1 :10 ará• nyú elegyével állandó keverés közben 7-re állítjuk be. A kivált CaSOé -iet és a kicsapódottsaennyező anyagoklat kiszűrjük, majd a tiszta 30 oldathoz 4Hszeres térfogatú acietont adunk, a csapadékot másnap szűrjük és_ 180 ml vízben oldjuk. Az oldalt összesen 12 TÍE-t és 3 000 000 KIE-t tartalmaz 2,2 TIE/g fehérje tisztaságban. A szervkivonatra vonatkoztatott termelés 60%. 35 4. példa: 10 kg marhatüdőből készült semleges vizes -kivonatot, ame^y 59 TIE és 17 000 000 KIE akti- 40 vitást tartalmaz, átengedünk 500 g-böl készült H+ -oiklusban levő Deoalso Y oszlopon. Az oszlopot kevés vízzel átmossuk, majd 0,2n HCl-t tartalmiazó 50%-os vizes etanol lassú átfolyatásával leoldjuk a megkötött polipepitideket. Az " összegyűjtött savanyú alkoholos oldathoz háromszoros térfogatú aoetomt adunk. A kivált csapadékot másnap szűréssel eltávolítjuk és 400 ml víziben feloldjuk. Az oldalt 31 TIE-t és 9 000 000 KIE-t tartalmaz 1,5 TIE/g fehérje tisztaságban. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kallikmein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött kinyerésére állati szervkivönatokból, mielyre jellemző, hogy a szervkivonatból a hiatóanyagolt szilikát-típusú adszorbensen pH 5—7 között megkötjük, mlajd az adszorbanst elkülönítjük, savas vízzel mossuk, az aktív polipeptideket pH 3 alá savanyított, vízzel hígított poláris szerves oldószereiéi leoldjuk' és az így nyert savanyú eluátumot ismert módon tovább tisztítjuk, 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a szilikát-típusú adsaorbens savval kezelt bentonit vagy szintetikus zeolit. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy az .aktív polipeptideket az adszorbensről pH 3 alá savanyított, vízzel 30—90%-osra hígított alacsony szénatomszámú alkohollal vagy ketonnal oldjuk le. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módija, melyre jellemző, hogy a leoldószert oxálsaiwal, kénsawal vagy foszforsavval megsavanyítjuk és a leoldás után a savat nehezen oldódó sója alakjában távolítjuk el. K A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6609544. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3
