153247. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidet tisztítással egybekötött kinyerésére állati szevkivonatokból
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1965. VI. 11. (GO—956) Közzététel napja: 1966. IV. 22. Megjelent: 1967. I. 20. 153247 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimái osztályozás: Feltalálók: Dr. Kelemen Ágnes gyógyszerész, 60fl/0 , Dr. Tolnay Pál vegyészmérnök, 25%, Dóra Sándor vegyészmérnök, 15%, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött kinyerésére állati szervkivonatokból A találmány tárgya eljiárás kallikrein-inhibi^ tor és tripszin-inhjlbítor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött kinyerésére állati szervfcivonátokból, így tüdő-, máj-, pamkreász-, lép-, vese-, pairotisz-, szúbmaxilláris mirigy-, gyomorbél- és izom^kivoníattokiból. Számos eljárás ismeretes e "polipeptidek, kinyerésére ós tisztítására állati szervkivonatokból. így pl. H. Kraúfr [Hoppes—Seyler's Z. physiol.. Ohem. 312, 161 (1958)] parotisz ecetsaivas vizes étianolos kivonatából az etanol lepárlása után acetonnal kicsapjál az aktív poliipieptiüéket. A 954 284 sz. német szábaidaloim szerinti eljárás a vizes szervkivonatlból a kísérő fehérjék nagy neszét triklórecetsavval eltávolítja, majd tízszeres térfogatú etándllal kicsiapja a kallilkrein-inhibitor és tripsain-iriibibitor hatású polipeptideklet. A 050 959 sz. német szabadalom a szervek savanyú alkoholos-vizes kivonása, az alkohol lepárlása és étieres extiralkció utóm a vizes fájásból az aktáv polipeptideilset vízzel elegyedő szerves oldószerrel csapja ki. Az 1 0'84 4®3 sz. német szabadalom a szerv matamolos kivonatából acetonnal ősapja ki az akitív polipeptideket. Az 1011596 sz. német szabadalom sawanyú vizee oldatlból acetonnal csapja ki a kallitaein4nhibitor és trip^zin-inhiibitar hatású polipeptidekeit. Az 1014 288 sz. német szabadalom leírt eljárás a triklóíreoeitsaivat tartalmazó vízzel készült kivonatból a trifclórecetsavnak éteres extrakció-10 15 20 25 c0 val való eltávolítása után fraifecionált amrnóniumszulfátos kiesapással tisztítja és nyeri ki az aktív polipeptideket. Az 1181 859 sz. német szabadalom H+ -eMusban levő kationcserélő műgyantán köti meg a fenti polipeptideket és arról pH 2,1 alatt vizes ásványi vagy erős szerves savval oldja le az inhibitor hatású peptidieteet. Az M. Lasfcowsky által leírt [J. Biol. Chem. 238, 32,74 (1963)] eljárás szerint nagy tisztaságú MgS04 -tal, majd (NH^SCVtal csapják ki az alkftív "péptideket, ezután H+ -cifclushan levő Amberlite IRC 50 vagy Amberlite XE 64 gyantán pH 6,8-as foszfátHpuffer jelenlétében kromatografálják a kivonattíit. A fenti módszerek ipari méretben való megvalósítása több szempontból hátrányos. Az eta<nolos vagy acetonos kicsapás hátránya a nagy mennyiségű költséges ós gyúlékony oldószer alkalmazása. Az ammóniumszulféitois vagy magnéziumszulfáitos kicsapás szintén előnytelen a még nagy térfogatiban levő polipeptiidek kinyerésére, minthogy urtóbbialk kicsapásához a fenti sókkal telíteni kell az oldatot. A H+ -eiklusban levő kationcsierélők alkalmazása a kallibrein-inhibitor és tripszin-inhiibitor hatáisú polipeptiaíek megkötésére vizsgálataink szerint azért- -nem megfelelő, mert minimális sótartalom is bizonytalanná teszi a megkötést, amely sómentes közegből sem specifikus. A megkötéshez igen nagy (az oldat KP/o-anak megfelelő) mennyiségű kafc-153247
