153084. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új polipeptid előállítására
153084 11 12 jük, 1500 ml piridinnel mossuk, az egyesített szüriedékeket szárazra pároljuk, és a maradványt forró ecetéterből kikristályosítjuk. 221 g Trit-Szer-Tir-OMe-t kapunk, olvadáspontja • 232°. [a]2oD = —34° dimetilformamidban. A kapott terméket 500 ml dimetilformamidban oldjuk, és hozzáadunk 100 ml ihidrazint. 24 óra hosszat 20°-on állni hagyjuk, az oldatot 5 1 vízbe öntjük, centrifugáljuk, az olajos maradványt 2000 ml eoetéterben oldjuk, és a kapott oldatot közömbös kémhatású vízzel mossuk. Nátriumszulfáttal megszárítjuk, szárazra pároljuk, és a maradványt éterrel mossuk. 182 g Trit-Szer-Tir-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja 120° (bomlás közben) [«]21 D = —30° dimtetilformamidban. 131 g KBÖ-Szer-OH-t és 95 g, H-Nle-OMe hidrokloridot feloldunk 2000 ml kloroformban és 70 ml trietilaminban, —10°-ra hűtjük, 'hozzáadunk 124 g diciklohexilkarbodiimidet, és 5 óra hosszat 20°-on keverjük. Leszűrjük, a szüredéket bepároljuk, a maradványt petroléterben és vízben mossuk, és megszárítjuk. Etilacetát-petroléterből átkristályosítva 151 g KBO-Szíer-Nle-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 71°. [a]22 o = ==—19° metanolban. A KBO-csoportot metanolban palládiumkatalizátor és egyenértékű menynyiségű hidrogénklorid jelenlétében katalitikus hidrogénezéssel lehasítjuk. A katalizátor elkülönítése, bepárlás és etiléterrél való kezelés után H-Szer-Nle-OMe-hidrokloridot kapunk. 46 g Trit-Szer-Tir-NHNH2 -t feloldunk 120 ml dímetilformamid, 120 ml izopropanol és 120 ml víz elegy ében, —10°-ra hűtjük, 44 ml 6n sósavat adunk hozzá, majd erőteljes keverés közben 3,5 g nátriumnitritet. 5 perc elmúltával 250 ml n káliumhidrogénkarbonátot és 1500 ml vizet adunk hozzá. Leszívatjuk, a szilárd terméket 200 ml dimetilformamidban oldjuk, 24 g H-Szer-Nle-OMe-hidrokloridot és 23 ml trietilamint adunk hozzá, és 20°-on 16 óra hosszat állni hagyjuk. Az oldatot 1000 ml vízbe öntjük, ecetéterrel extraháljuk, nátriumszulfát fölött megszárítjuk, és bepároljuk. A maradványnak éterrel való mosása után 56,5 g Trit-Szer-Tir-Szer-Nle-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 130—140° (bomlás közben). [oc]w D =—7° dimetilformamidban. A kapott terméket 200 ml forró etanolban oldjuk, 3 ml hidrazint adunk hozzá, 24 óra hoszszat 20° állni hagyjuk, 200 ml étert adunk hozzá, szűrünk, éterrel mosunk, és vákuumban foszforpentoxid és tömény kénsav fölött szárítunk. 51 g Trit-Szer^Tir-Szer-Nle-NH-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 205°. 6,1 g Trit-Glu(OTB)-(Trit)Hisz-Fe-Arg-Tri-Gli-(KTB)Liz-Pro-OCF.HCl-t és 5,7 g H-Val-Gli--(KTB)Liz^(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-Pro-Val-(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t 20 ml dimetilformaimidban oldunk, 3,0 g imidazolt adunk hozzá, és 3 napig 20°-on állni hagyjuk. Még 0,6 g-ot adunk hozzá ugyanabból az oktapeptid-Ihidrokloridból és még 16 óra hosszat 20°-on állni hagyjuk, majd ecetéterrel kicsapjuk, szűrőre visszük, a csapadékot etanolban oldjuk, edetéterrel kicsapjuk, szűrjük, a csapadékot etanolban oldjuk, ecetéterrel kicsapjuk, szűrjük és megszárítjuk. 8,0 g Trit-Glu(OTB)-(Trit)Hisz» -Fe-Arg-Tri-Gli-(KTB)Liz-Pro-Val-Gli-(KTB)Liz^(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-Pro-Val-5 (KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH 2 -t kapunk (olvadáspontja 195° bomlás közben, [a]20 D =—27° dimetilformamidban), ezt 200 ml vizes ecetsavban (2 :8) oldjuk, 2 óra hosszat 30°-on állni hagyjuk, bepároljuk, ecetéterrel mossuk, szűr-10 jük, és megszárítjuk. 7 g H-Glu(OTB)-(Trit)Hisz-Fe-Arg-Tri-Gli-(KTB)-Liz-Pro-Val-Gli-(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-Pro-Val-(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 .acetátot kapunk. 1,65 g Trit-Szer-Tir-Szer-Nle~NH-NH2 -t fel-15 oldunk 6 ml dimetilformamidban, 2 ml vizet adunk hozzá, —lO'-ra hűtjük, 1 ml 6n sósavat adunk hozzá, 140 mg nátriumnitritet keverünk bele, 5 percig —5°-on keverjük, 300 ml 0,2n káliumihidrogénkarbonát oldatot adunk hozzá, 20 és centrifugáljuk. A kapott Trit-Szer-Tir-Szer-Nle-N3 -t 50 ml dimetilformamidban oldjuk, 5,02 g H-Glu-(OTB)-(Trit)Hisz-Fe-Arg-Tri-Gli-(KTB)Liz-Pro-Val-Gli^(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-(KTB)Liz-Pro-Val-(KTB)Liz-Val-Tir-25 -Pro-Val-NH 2 .acetátot adunk hozzá, 12 óra hoszr szat 0°-on állni hagyjuk, még további, 1,0 g Trit-Szer-Tir-Szer-Nle-jNHNH2 -ből előállított tetrapeptidazidot adunk hozzá, 6 óra hosszat 0°-on állni hagyjuk, bepároljuk, écetéterrel feldolgoz-30 zuk, forró acetonnal és ecetéterrel mossuk, és vákuumban megszárítjuk. A kapott terméket 100 ml trifluoreoetsavban oldjuk, 1 óra hosszat 20°-on nitrogénatmoszférában állni hagyjuk, bepároljuk, ecetéterrel feldolgozzuk, szűrjük, és 35 megszárítjuk. A kapott terméket 500 ml 0,2 n ecetsavban oldjuk, az oldatot acetátfázisú Amberlit-IRA-410-zel kezeljük, szűrjük, és liofilizáljuk. Megszárítva nátriumhidroxid felett 3,5 g H-Szer-Tir-Szer-Nle-Glu-Hisz-Fe-Arg-Tri-Gli-40 -Liz-Pro-Val-Gli-Liz-Liz-Liz-Liz-Pro-Val-Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -aoetátoit kapunk, amely kromatografálva és elektroforizálva homogénnek mutatkozik. (Teljes hidrolízise a következő aminosaivösszjetételre mutat: Szer1 , 8 Tir 1 , 9 Nle 1 , 0 -45 Gluo,9Hisz1 ,iFe 1 , 0 Arg 1 , 1 Gli 2! oLiz 6 , 1 Pro2 !9 Val4,o; a Tri, mint ismeretes, isavas teljes hidrolízis közben elbomlik.) A termék akár eredeti állapotában, akár más sóvá átalakítva felhasználható. Szilárd állapotban, oldatban vagy adszorbátum-50 ként tartható el. 6. példa: 55 Terc.-amiltiofenilkarbonát előállítása 296 ml terc.-amilalkoholt feloldunk 212 ml piridinben és 800 ml kloroformban, és 20°-on 410 g Hórtiohangyasav-S-femiésztert csepegtetünk hozzá. A reakció lezajlása után még 4 óra 60 hosszat 70°-on keverjük. Híg sósavval, nátriumhidrogénkarbonát oldattal és tömény konyhasóoldattal mossuk. Az oldószert elpárologtatjuk, és a maradványt frakcionált desztillációnak vetjük alá. 390 g terc.-amiltiofenilkarbonátot ka-S5 punk. Forráspontja 4—5 mm Hg-nál 105—107°. 6
