153084. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új polipeptid előállítására
5 153084 6 mint például a metoxi-, az etoxi-, a •terc.-amiloxi-, az amid- és a benziloxi-csoport is, A hisztidingyök imidazol-csoportjának blokkolására a trifenilmetil-csoport vált be, de felhasználhatók egyéb alkalmas védőcsoportok, mint például a karbo-terc.-butoxi-, a karbo-terc.-amiloxi-, a karbobenzoxi- és a benzílcsoport is. A következő rövidítéseket alkalmazzuk: KBO = karbobenzoxi Trit = tritil = trifenilmetil KTB = •karbo-terc.-butiloxi KAT = karbo-terc.-amiloxi OCF — 2,4,5-trikiórfenoxi OTB = terc.-butoxi OiMe = metoxi OEt = etoxi Arg = L-arginil Glu = L-glutamil Gli = glieil Hisz = L-hisztidil Liz = L-lizil Nie = L-norleucil Fe = L-fenilalanil Pro = Lwprolil Szer = L-szeril Tri = L-triptofanil Tir = L-tirozil Val = L-valil Az alábbi példák az eljárás végrehajtását szemléltetik, de a találmány terjedelmét semmiképpen sem korlátozzák. A példákban a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. 1. példa: «-Nnkarbobenzoxi-^-N-karbo-terc-butoxi-L-lizin-2,4,5-triklórfenilészter [KBO-(KTB)Liz-OCF] (A ábra) előállítása 104 g «-N-karbobenzoxi-s-N-karbo-terc-butoxi-L-lizint és 70 g 2,4,5-triklórfenolt feloldunk 900 ml kloroformban és $0 ml aieetonitrilben, és —10°-on hozzáadunk 56 g diciklohexilkarbodiimidet. Két óra hosszat rázzuk, majd leszűrjük a karbamidról. Az oldószer elpárologtatása után a maradványt etanolban oldjuk és petróléterrel kicsapjuk. Etanolos vízből átkristályosítva 140 g «-N-kar-bobenzoxi-s-NJkartoo--terc.-butoxi-L-lizin-2,4,5Jtriklórfenilésztert kapunk. Olvadáspontja 99°. [«J22 ^ = -11° dimetilf ormamidban. 2. példa: L-valil-e-N-karbo-tere.-butoxi-L-lizil-L-vaMl-L-tirozil-L-prolil-L-valinamid {H-Val-{KTB)-Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 ] előállítása (A ábra) 50 g L-prolil-L-valinamidot <H-Pro-Val-NH2 ) és 100 g KBO-.(KBO)Tir-OCF-et feloldunk 100 ml dimetilformamidban, 48 órán át 20°-on állni hagyjuk és leszűrjük. Az oldathoz 500 ml n sósavat adunk, és az olajos maradványt ecetéterben oldjuk. Híg sósavval és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal való mosás után szárazra pároljuk. Átkristályosítás után ecetéter-dietiléter-5 bői 100 g KBO-(KBO)Tir-Pro-Val-NH2 -t kapunk (o. p. 133°). Ebhez 90 ml 2n nátronlúgot és 200 ml etanolt adunk. 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1000 ml n sósavat adunk hozzá. A maradványt előbb víz-10 zel, majd szárítás után ecetéterrel mossuk. 60 g KBO-Tir-Pro-Val-NH2 -t. kapunk. Olvadáspontja 220°. [«]21 D = —23° dimetilf ormamidban. A kapott terméket 200 ml jégecetes 4n hidrogénbromid oldatban oldjuk és 1 óra hosszat 20°-on 15 állni hagyjuk. Dieíiléter-eoetéter hozzáadására a H-Tir-Pro-Val-NH2 hidrobromidként kicsapódik. Olvadáspontja 220°. 42 g H-Tir^Pro-Val-NH2 .HBr-t feloldunk 200 ml dimetilformamidban, és hozzáadunk 36 g N-20 karbobenzoxi-L-Valin-2,4,5-tr iklórf enilésztert (KBO-Val-OCF) és 12 ml trietilamint. 48 óra hosszat szobahőmérsékleten rázatjuk, és hozzáadunk 500 ml n sósavat. A kicsapódott terméket ecetéterben oldjuk, és híg sósavval és nát-25 riumhidrogénikarbonát oldattal mossuk. Az eeetéteres oldatot éterrel kicsapatjuk. 39 g KBO-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 127°. [«]21 D = — 26° dimetilformamidban. A kapott terméket 200 ml jégecetes 4n hid-30 rogénbromid oldatban oldjuk, és 1 óría hosszat 20°-on állni hagyjuk. Dietiléter-ecetéter hozzáadására 32 g H-Val-Tir-Pro-Val-NH2 .HBr csapódik ki. 29 g H-Val-Tir-Pro-Val-NH2 .HBr és 33 g KBOf-35 -(KTB)Liz-OCF-et (1. példa) 100 ml dimetilformamidban oldunk, és 7,5 ml trietilamint adunk hozzá. 48 óra hosszat 20°-cm rázatjuk, hozzáadunk 500 ml n ecetsavat, és a kicsapódott terméket vízzel, majd eoetéterrel mossuk. 40 35 g KBO-(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2-t kapunk. Bomlás közben 125°-on olvad. [«]21D = *=? —25° dimetilformamidban. 39 g KBO^(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t 500 ml metanolban oldunk, és közönséges nyo-45 máson palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Leszűrjük, vákuumban bepároljuk, és a maradványt éterrel kezeljük. Ily módon 28 g H-(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja bomlás közben 145°. [O]21 D = 50 ——30° dimetilformamidban. 33 g H-(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t és 23 g KBO-Val-OCF-et feloldunk 150 ml dimetilformamidban és 48 óra hosszat 20°-on állni 55 hagyjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradványt kevés n-butanolban és ecetéterben oldjuk. Híg kénsavval és nátriurahidrogénkarbonát oldattal való mosás után szárazra pároljuk. Dietiléterrel kezelve 33 g N-KBO-Val-60 -(KTB)Liz-Val-Tir-Pro-Val-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 171°. [a]21 D = —• 27° dimetilformamidban. A kapott terméket 500 ml metanolban oldjuk, és közönséges nyomáson palládiumkatalizator jelenlétében hidrogénezzük. Leszűrjük, 65 vákuumban bepároljuk, és 40°-on megszárítjuk. 3
