152817. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az egyenesláncú szénhidrogének teljes vagy részleges eltávolítására szénhidrogénelegyekből
152817 6 A Penicillium roqueforti, Penicillium notatuim, Aspergillus fussigatus, Aspergillus niger és .Aspergillus versicolor szénhidrogéneket tartalmazó szilárd táptalajon tenyészthetők. A mikroorganizmusok tenyésztéséhez a szén- 5 tartalmú nyersanyagokon kívül víztartalmú tápközegről és oxigénről (előnyösen levegő alakjában) is gondoskodni kell. A Nocardia (az Actinomycetales rendbe tartozó nem) tenyésztésére alkalmas táptalaj össze- 10 tétefe a következő lehet: ammóníumszulfát 1 g magnéziumszulfát 0,20 g vas(II)szulfát—7H2 0 0,005 g 15 mangánszulfáj—H2 0 0,002 g monokáliumfoszfát , 2 g dinátriumfoszfát 3 g kalciumklorid 0,1 g nátriumkarbonát 0,1 g . 20 élesztőkivonat 0,008 g desztillált vízzel' feltöltve 1000 ml-re. Másfajta baktériumok tenyésztésére az alábbi összetételű táptalaj alkalmazható: 25 monokáliumfoszfát 7 g magnéziumszulfát—7H2 0 0,2 g nátriumklorid 0,1 g ammóniumklorid 2,5 g 30 vízvezetéki víz (nyomelemek) 100 ml élesztőkivonat 0,025 g desztillált vízzel feltöltve 100,0 ml-re Az élesztők (és penészgombák) tenyésztésére 35 alkalmas tápközeg a következő összetételű lehet: : i ! ;::?;*;: diammóniumfoszfát 2 g káliumklorid 1,15 g 40 magnéziumszulfát—7H2 0 0,65 g cinkszulfát 0,17 g mangánszulfát—H2 0 0,045 g vas(II)szulfát—7H2 0 0,068 g vízvezetéki víz 200 g 45 élesztőkivonat ( 0,025 g desztillált vízzel feltöltve 1000 ml-re A mikroorganizmusok, különösen az élesztők, a széntartalmú nyersanyagként felhasználásra 50 kerülő szénhidrogénfrakciók jelenlétében először történő tenyésztésük ^során olykor nehezen fejlődnek, és olykor szükséges lehet inokulumként oly mikroorganizmusokat alkalmazni, amelyeket -előzőleg már adaptáltunk a felhasználandó szén- 55 hidrogénfrakciók jelenlétében való fejlődésre. Emellett a mikroorganizmusok, bár megfelelő tápelemeket tartalmazó vizes ásványi közeg jelenlétében tenyésztjük őket, gyakran azért is nehezen fejlődnek, mert a felhasználásra kerülő 60 szénhidrogénfriakció nem tartalmaz olyan növekedési faktorokat, amelyek egyébként a szénhidrát alapú tápanyagokban jelen vannak, ezért célszerű lehet ilyen növekedési faktorokat hozzáadni a tápközeghez. 65 Elősegíti a mikroorganizmusok fejlődését, ha a tápközeghez igen kis mennyiségű élesztőkivonatot (az élesztő hidrolízise útján nyert, B-caoportbeli vitaminokban gazdag ipari termék) vagy általában B-csoportbeli vitaminokat és/ vagy foiotint adunk. Ezek mennyisége a vizes tápközegre számítva 25 mg/liter körül lehet. Alkalmazhatunk azonban ennél nagyobb vagy kisebb mennyiséget is, a fejlődés kívánt feltételeitől függően. A mikroorganizmusok fejlődésük során felhasználják a kiindulóanyagként alkalmazott sZiénhidre-génfrakciőt, miközben közbenső termékként savas csoportot tartalmazó vegyületek, főként zsírsavak képződnek, oly módon, hogy a -vizes ásványi tápközeg pH-értéke fokozatosan csökken. Ha nem gondoskodunk a kedvező pH-érték helyreállításáról, akkor a mikroorganiz^ musok fejlődése eléggé hamar megakad, és a sejtkoncentráció a tápközegben nem növekszik tovább, vagyis ún, stacioner fázis áll be a mikroorganizmus fejlődésében. Ezért előnyös a vizes tápközeget a kívánt pH-értéken tartani, .valamely nagy pH-értékű vizes közeg adagonkinti vagy folytonos hozzáadása útján. Penészgombák vagy élesztők, különösen a Candida lipolytica mikroorganizmus alkalmazása esetén a pH-értéket általában 3 és 6 között, előnyösen 4 és 5 között tartjuk. (Baktériumok esetében az előnyös pH-tartomány magasabb, rendszerint 6,5—8). A tápközeghez való hozzáadásra alkalmas alkalikus anyagok példáiként nátriumhidroxid, káliumhidroxid, dinátriumhidrogénfoszfát és ammónia említhetők; ezeket szabad állapotban vagy vizes oldatban adagolhatjuk a kultúrához. A mikroorganizmusok tenyésztésének legkedvezőbb hőmérséklete a mikroorganizmusok fajtájától függően változik, általában azonban 25— 35 C° lehet. Candida lipolytica alkalmazása esetén az előnyös hőmérséklettartomány 28 C° és 32 C° között van. Az oxigénfelvétel lényeges a mikroorganizmusok fejlődése ~ szempontjából. Gyors fejlődés fenntartása érdekében az oxigént szolgáltató levegőt finom buborékok alakjában, keverés hatására juttatjuk a tápközegbe. A levegőt zsugorított vagy egyéb pórusos felületen át vezethetjük be a tápközegbe. Kívánt esetben az ún. örvénylő szellőztetést is alkalmazhatjuk a levegővel való benső érintkeztetésre. Azt találtuk, hogy a Candida lipolytica élesztőtörzs és örvénylő szellőztetés alkalmazása esettén olyan gyors mikroorgahizmusfejlődést érhetünk el, hogy a generációs idő kb. 2—5 óra, a sejtkoneentráció pedig 2 nap alatt tizenkétsze- , résére is növekszik. Szakaszos fermentáció esetén a mikroorganizmusok kezdetben általában lassan fejlődnek a sejtkoncentráció növekedése szempontjából. (A fejlődésnek ezt a szakaszát „késleltetett fázis"nak nevezzük). Ezután a fejlődés üteme meggyorsul; ezt a nagyobb fejlődési sebességű szakaszt „exponenciális fázis"-nak nevezzük. Utá-3
