152802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására
152802 15 16 lyosítás után 151 g CBO-JSer-Nle-OMe nyerhető, op. 71°; >]D 22 = —19° metanolban. A termék CBO-csoportját palládmmrkatalizátor jelenlétében metanolos közegben történő katalitikus hidrogén ezésisel lehasítjuk, 1 egyen- 5 érték hidrogénkloridot is adva a hidrogénezési reakciáelegyhez. A katalizátor elválasztása, bepárlás és etiléter hozzáadása után mennyiségi hozammal kapjuk a H^Ser-iNle-iOMe-hidrokloridot. 10 46 g Tri-Ser-Tyr^ISPHN)H2 120 ml dimetilformamid, 120 ml izopropianol és 1120 ml víz elegyével készített oldatát —10° hőmérsékletre hűtjük, 44 ml 6 n sósavat adunk hozz4, majd élénk keverés köziben 3,5 g nátriuninitritet 15 adunk az elegyhez. 5 perc múlva 250 ml n-káliumhidrogénkarbonátoldatot és 1500 ml vizet adunk hozzá. A kapott szilárd terméket leszíva tással elkülönítjük, 200 ml dimetilformamidban oldjuk, majd 24 g H-íSe^Nde-OMe-hidro- 20 kloridot és 23 ml trietilamint adunk az oldathoz és 16 óra hosszat hagyjuk 20° hőmérséklerten állni. -« Az oldatot ezután 1000 ml vízbe öntjük, etilacetáttal extralbálunk, az; etilaoetátos oldatot 25 vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel mosva 56,5 g Tri-Ser-Tyr-SernNlieOMe nyerhető, amely 130— 140°-on bomlás közben olvad. A fenti módon kapott terméket 200 ml forró 30 etanolban oldjuk, az oldathoz 3 ml hidrazint adunk, 24 óra hosszat hagyjuk 20° hőmérsékleten állni, majd 200 ml étert adunk hozzá, szűrünk, a 'kapott terméket éterrel mossuk és vákuumban, foszforpentoxid és tömény kénsav 35 felett megszárítjuk. Ily módon 51 g Tri-Ser-Tyr-Ser-NleHNHNIIfe nyerhető, op. 205°. 8,8 g TrÍHSer-Tyr-«er-(Nle-,NH!N;H2 30 ml dimetilformaimiddal készített oldatához 10 ml vi- 40 zet adunk, —10° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, 5 'ml 6 n sósavat, majd 750 mg nátriumnitritet adunk hozzá, 5 percig keverjük -^5° hőmérsékleten, azután 300 ml 0,2 n káliumhidrogénikarbonátoldatot adumik hozzá és oentrifu- 45 gáljuk, Az így kapott Tri-iSer-Tyr-Ser-JNTle-azidot 50 ml dimetilíormamidban oldjuk, majd 20 g H-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-(For)Lys-Pro-Val-Gly-(For)íLys-(For)Lys^Arg-Arg-Pro-Val(For)Lys-Val-TyrnPro-Val-JNH2-ot és 5 ml vizet 50 adunk az oldalihoz, majd alkalikus reakcióig trietilamint adunk hozzá. Az elegyet 12 óra hosszat hagyjuk 0° hőmérsékleten állni, azután további, 4,8 g Tlri^Ser^Ty^Ser-Nle-^NH^ból előállított tetrapeptidazidot adunk hozzá, 6 óra 55 hosszat hagyjuk az elegyet 20° hőmérsékleten állni, majd nagyvákuumban szárazra pároljuk be, forró aoetonnal, azután etUaoetáttal és metilénkloriddal mossuk és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 23 g Tri-Ser-Tyr-Ser-iNle-Glu- 60 -His-Phe-Arg-Try-Gly-(For)Lys-Pro-Val-Gly-(ForJiLys-CForJLys^Arg-^Arg-Pro^ Val- (For)Lys-Val-Tyr-Pöco^Val-JNH2 nyerhető. A termék 189°on olvad bomlás, kőiben. [«]D 21 = —57° 95%-os ecetsavban. 05 15. példa: L-szeril^tirozil-iLf-szeril-lj-norleucil--L-glutamil-il^hisztidil-fLHfenilanalE-L-^rgimljLr-triptofianil-glicil^L-lizil-(L^rohl-Ij-valil-igliicil-!L4izil-íL-lizil-L-argi,ml-.L-argiml-iL-paTolid-lr-vaUl-iL-lizil-L-- valil-L-tir ozil-L-prolil-lLi- valinamid; HHSer-Tyr^Ser-JNlejGlu-His-Phe-.Arg^Try-Gly-MLys-Pro-Val-Gílys-Lys-íLys-Arig^Arg-Pro-Val-Lys-Val-Pyr-Pro-Val-ÍNH2 (vö. F. ábra) a) 10 g védett pentakozapeptidet oxigén kizárásával 5000 ml 0,1 n sósavoldatban 3 óra hosszat 100°-ra melegítünk keverés közben, majd az oldatot vákuumban bepároijufc, a maradékot apetonnal és etiléterrel mossuk, majd vákuumban megszárítjuk. Trifluorecetsav/szék. butanol/víz (1 :,120 :160) rendszerben lefolytatott ellenáramú megosztás után 7,4 g főfrakciót kapunk, amely ugyanolyan hatásosságot mutat, mint a kortikotropin és amely kromatograf álás és elefctroíorézis farán homogénnek mutatkozik. Az anyag migrációja papír-elektroforézisiben 5,8 pH-értók és 40 V/om mellett 60 perc alatt 56 imm (az összehasonlításul alkalmazott hisztidin 61 mm-t vándorol). A migráció papírelektoforézisfoen 1,9 pH-érték és 40 V/cm esetén 60 perc alatt 121 mm (az összehasonlításként alkalmazott gluitaminsav ugyanilyen körülmények között 97 mm-t vándorol). Az n-butanol/ecetsav/víz 70 :10 : 20 rendszerben végzett papírkromatográfia során az Rf-érték 0,01. A termék teljes hidrolízise az alábbi aminosav-összetételt mutatja: Sen,8 Tryi, 9 iNlei,oGluo,gHis 1 , 1 Phe 1 , 0 Arg3,2Gly 2 ,o--Lys4,iPro2,gVal4,o. A tirozin a savas teljes hidrolízis alkalmával ismeretes módon elbomlik. A fenti terméket vagy közvetlenül ebben az állapotban, vagy valamely más sóvá való átalakítás után használlhatjulk fel. A termék szilárd alakban,-oldatban vagy adszorbát alakjában tárolható. Acetátfázisban levő kationos ioncserélő gyantával előállítható az acetát. Ez 172°-on olvad bomlás közben. [«]D 20 =—84°± 1° (c = 1,1 n ecetsavban). b) 10 g védett pentakozapeptidet 500 ml jégecet és 500 ml víz elegyében oldunk, 10 percig 100°Hra hevítjük, majd bepároljuk az oldatot, a maradékot 5O0O ml 0,1 n sósavban oldjuk, 3 óra hosszat 100° hőmérsékleten tartjuk, majd a továbbiakban az a) alatt leírt módon járunk el. c) 10 g védett pentakozapeptidet 1200 ml trifluorecetsavban oldunk, az oldatot 30 percig hagyjuk 20° hőmérsékleten állni, majd bepároljuk, a maradékot 5000 ml 0,2 n sósavoldatban oldjuk, az oldatot 90 percig 100° hőmérsékleten hevítjük, majd a /továbbiakban az a) alatt leírt módon járunk el. d) 10 g védett pentakozapeptidet 4500 ml 0,5 n metanolos sósavoldatban oldunk, időnkénti keverés közben 24 óra hosszat 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, imajd bepároljuk az oldatot,
