152548. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására
3 152548 4 rülete a parenchimás vérzések megelőzése és gyógyítása terén van, amikor is a szöveteknek az (I) vegyülettel történő infiltrálása határozott ischaemisatiós hatással jár. Különösen a fül-orr-gégegyógyászati, nőgyógyászati és szülészeti, urológiai és fogászati területen történő sebészeti beavatkozások alkalmával kerülhet az (I) vegyület gyakorlati alkalmazásra. Ennek során ezt a vegyületet vagy az alkalmazott helyi érzéstelenítőszerhez adjuk hozzá, vagy általános narkózissal végzett műtétek esetén fiziológiás konyhasóoldattal hígítva infiltráltatjuk e vegyületet. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitele pl. az alábbi módon történhet: N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitint glicin-etilészterrel N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluol-szulfonil-L-ornitil-glicin-etilészterré kondenzálunk. A karbobenzroxi-csopórt lehasítása után a kapott N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-etilésztert N-karbobenzoxi-L-prolinnal N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-etilészterré kondenzáljuk, amelyet azután a megfelelő amiddá alakítunk át. A karbobenzoxicsoport lehasítása után a kapott L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot N--karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-cisztein-aziddal N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil--L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamiddá kondenzáljuk. A karbobenzoxi-csoport lehasítása után a kapott L-glutaminil-L--aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot N-karbobenzoxi-S-benzil-L-tiszteinil-L-tirozil-L-fenilalanin-aziddal N-karbobenzoxi-S-benzil-L--ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-ibenzil-L-cisZiteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamiddá kondenzáljuk. Ezt a nonapeptid-származékot cseppfolyós ammóniában valamely alkálifémmel, előnyösen nátriummal, vagy káliummal kezeljük, amikor is az (V) képletű lineáris nonapeptidet kapjuk. Ezt oxidációval, előnyösen levegő, oxigén vagy hidrogénperoxid segítségével vizes oldatban, az (I) képletű biológiailag aktív ciklusos polipeptiddé alakítjuk át. Ä találmány szerinti eljárással előállított, eddig ismeretlen (I) képletű polipeptidet szabad bázis vagy valamely szerves vagy szervetlen savval képezett só alakjában, egymagában vagy megfelelő gyógyszer-alakokba kiszerelve, parenterális, enterális vagy intranazális úton alkalmazhatjuk a gyógyászatban. A megfelelő gyógyszer-alakok előállítása céljából e vegyületet farmakológiailag közömbös szervetlen vagy szerves segédanyagokkal kombinálhatjuk. Ilyen segédanyagokként pl. tabletták és drazsék előállítása seetén tejcukor, keményítő, talkum, sztearinsav stb., szirupok előállítása esetén szacharóz-, invertcukor-, glükóz-oldatok és hasonlók, injekciós készítmények előállítása esetén víz, alkoholok, glicerin, növényi olajok és hasonlók, végbélkúpok előállítása esetén természetes vagy keményített olajok, viaszok és hasonlók alkalmazhatók. Emellett az ilyen készítmények megfelelő tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő-, oldásközvetítő-, édesítő-, színező-, 5 illatosítószereket stb. is tartalmazhatnak. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; e példákban a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. 10 A papírkromatogramban és a papírelektroforézisben a I polipeptid-vegyület homogénnek bizonyult. Az Rf-érték a felszálló kromatogramban butanol/jégecet/víz 70 : 10 :20 arányú rendszerben 0,05; metiletilketon/piridin/víz 15 65 :15 : 20 arányú rendszerben 0,12. A papíron végzett nagyfeszültségű elektroforézisben a I polipeptid pH 5,8-nál piridin/ ecetsav/víz 9:1:90 rendszerben a hisztidintávolság 7/10-ére (E°5, 8 = 0,7 His); és 1,9 pH-20 nál hangyasav/eoetsav/víz 15 :10 : 75 rendszerben a triptofán-távolság 9/10-ére vándorol; Eo1>9 = 0,9 Try. 6 N sósavval 16 óra alatt 110 C°-on, levegő távollétében végzett teljes hidrolízis a helyes 25 arányban adja meg a várt aminosavakat. 1. példa: a) N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfo-30 nil-L-ornitil-glicin-etilészter 104 g N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitint és 27 g glicin-etilésztert 450 ml acetonitrilben oldunk, az oldatot 0 C°-ra 35 hűtjük, 51 g diciklöhexil-karbo-diimidet adunk hozzá és az elegyet 4 óra hosszat szobahőmérsékleten rázzuk. A levált diciklohexil-karbamidot leszűrjük és acetonitrillel utánamosunk. Az egész szüredéket vákuumban bepároljuk. A 40 maradék petroléter hozzáadása után kristályosodik. A kapott terméket n-propanolból átkristályosítva 93 g N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-etilésztert kapunk, amely 136 C°-on olvad; (<*)D 22 = —6,5° 45 (96°/<ros etanolban). b) N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-amid 50 90 g N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-etilésztert 800 ml brómhidrogénsawal telített vízmentes ecetsavban oldunk. Az oldatot egy óra hosszat 20 C° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban, 55 40 C° alatti hőmérsékleten bepároljuk és a maradékot dietiléterrel gondosan utánamossuk. A kapott maradékot 500 ml acetonitrilben oldjuk, az oldathoz 25 ml trietilamint és 43 g N-karbobenzoxi-L-prolint adunk, 0 C° hőmérsék-60 létre hűtjük, majd 35,5 g diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá és éjjelen át rázzuk 20 C° hőmérsékleten. A diciklohexü-karbamid kiszűrése után a szüredéket vákuumban 30 C° hőmérsékleten bepároljuk, a maradékot etilace-65 tatban oldjuk és ezt az oldatot híg kénsawal, 2
