152502. lajstromszámú szabadalom • Eljárás streptomiciéták antibiotikumtermelőképességének fokozására
- 152502. 10 az 1. bekezdés szerint szintetikus folyékony táptalajon 10 órán át inkubáljuk rázóasztalon,^ 28 C°-on s az inkubálás után a fenti szilárd táptalajra oltjuk, 100-szoros hígítás után. A használt táptalaj azonban 4,5 y/ml mutáló ágenst és 0,1% dimetilformamidot tartalmaz. 18 nap után a bepsórásodott tenyészetből izoláljuk a fent leírt agaros táptalajra az A—802934 jelű törzset, melynek antibiotikus aktivitása 6200 E/ml, a fenti rázott tenyésztési módszerrel vizsgálva. A Streptomyces aureofaciens A—802934 jel- •" zésű törzset az 1. bekezdés szerinti szilárd táptalajra oltjuk — a megfelelő hígítású spóraszuszpenziót használva. — A bespórásodott tenyészetből természetes szelekció révén az 15 A—116007 jelű utódot nyerjük, melynek antibiotikus aktivitása 7300 E/ml, a fenti rázott tenyésztési módszerrel vizsgálva. 2. A Streptomyces aureofaciens C—81305 , törzs spóráit az 1. példa szerinti módon mutagen 20 behatásnak tesszük ki, azonban a szilárd táptalajba 2,5 y/ml 5-nitro-2-furaldehid-szemikarbazont és 0,05% dimetilformamidot teszünk. A 16 napos tenyészetből átoltással nyert A—801700 jelű törzs antibiotikus aktivitása 4600 E/ml, az 1. példa szerinti rázott tenyésztési módszerrel vizsgálva. Az eljárást ismételten alkalmazva az antibiotikus aktivitás az 1. példában megadotthoz hasonlóan növekszik. 3. A Streptomyces aureofaciens C—'81305 törzs spóráit az 1. példa szerinti módon mutagen behatásnak tesszük ki, azonban a szilárd táptalajba 2,5 y/ml N-(5-nitro-2-furfurilidén)-l-aminohidantoint és 0,05% dimetilformamidot teszünk. A 16 napos tenyészetből átoltással nyert A—801300 jelű törzs antibiotikus aktivitása 4050 E/ml, az 1. példa szerinti rázott tenyésztési módszerrel vizsgálva. Az eljárást ismételten alkalmazva az antibiotikus aktivitás az 1. példában megadotthoz hasonlóan növekszik. 4. A Streptomyces rimosus D—1 jelzésű törzs spóráit (antibiotikus aktivitása 3400 mcg/ml) 28 C°-on, 12 órán át rázóasztalon inkubáljuk. Az alkalmazott táptalaj a következő: keményítő 4,0%, szójaliszt 1,0%, CaC03 0,5%, NH 4 NO s 45 0,4%, NaCl 0,3%, KCl 0,3%, MgSCX, 0,01%, Co(N03) 2 0,004%, H3BO3 0,5%, pH: 7,0. Az inkubáció után a csírázásnak indult spóraszuszpenziót a mutagen ágenseket tartalmazó táptalajra szélesztjük, 100-szoros hígítással, 50 25 30 35 40 majd 28 C°-on 12 napig inkubáljuk. A szilárd táptalaj összetétele: kukoricalekvár (nedves) 2.0% keményítő 1,5%, KH2 P0 4 0,2%, (NH4) 2 S0 4 0,4o/o, CaC03 0,3%, agar 2,5%; pH == 6,8. Ehhez a táptalajhoz 60 C°-on, steril körülmények között annyi l-(nitro-furfurilamiho)-2--imidazolidin-tion-t adunk, dimetilformamidban oldva, hogy koncentrációjuk 7,5 y/ml, illetve 0,15% legyen. A 12 napos inkubáció után keletkezett tenyészetből fenti összetételű szilárd táptalajra történő átoltással nyerjük a DF—14 jelű törzset, melynek antibiotikus aktivitása a fent leírt folyékony táptalajon vizsgálva, rázott tenyésztési körülmények között: 4150 mcg/ml. Szabadalmi igénypontok: „ 1, Eljárás antibiotikumot termelő streptomicélák antibiotikum termelőképességének fokozására, amelyre jellemző, hogy a törzset 02 N képletű gyököt tartalmazó vegyület jelenlétében mutagen behatásnak vetjük alá. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a mutációhoz az l-(5-nitrofurfurilidén-amino)-2-imidazolidin-tiont, vagy 5-nitro-2-furaldehid-szemikarbazont, vagy az N-(5-nitro-2-furfurilidén)-l-aminohidantoint alkalmazzuk. 3. Az 1—2. igénypontok szerinti eljárás foganatosítás! módja, amelyre jellemző, hogy a nitrofurán származékot 1,0 y/ml-től 20,0 y/ml koncentrációban alkalmazzuk. 4. Az 1—3. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a mutációt savamidok, pl. dimetilformamid jelenlétében idézzük elő, amelyet előnyösen 0,01-től 0,5 tf.% mennyiségben alkalmazunk a táptalajra számítva. 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a mutagen behatás előtt a használt spóraszuszpenziót inkubáljuk, célszerűen szintetikus folyékony táptalajban, 4—20 órán át. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó Igazgatója 6605528. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—28.
