152192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos nystatin előállítására

- 1521! 1 járásunk alkalmazása esetén az acetonos kieselés és a szárítás együttes vesztesége 1%, míg az ismert eljárások esetében 4—9%. Eljárásunk foganatosításakor oly módon járhatunk el, hogy a fermentáció során nyert mi- S céliumot sűrűn folyós konzisztencia eléréséig szűrjük, mikoris annak víztartalma 70—75%. A nedves mieéliumot a bennelevő vízmennyiség kétszeresének megfelelő acetonban szuszpendálva 30—35% víztartalmú acetonos ele- 10 gyet nyerünk, amely kioldja az olajos anyagodkát, míg a nystatin változatlanul a micéliumban marad. Az acetonos elegyet szűrjük, a nyert aceton-nedves mieéliumot levegőáramban, vagy előnyösen vákuumban 50—100 Hgmm nyomás 15 mellett megszárítjuk. Ezután közvetlenül az olaj mentesített, szárított mieéliumot extraháljuk számított mennyiségű, kalciumkloridot tartalmazó metanollal. Az exéraháló metanol kálciumklorid tartalma 1—4> 20 előnyösen 2%. A kálciumkloridos metanolt olyan mennyiségben alkalmazzuk, hogy (90% hatásfokú extrakció feltételezve) a metanolos extrakt nystatin tartalma 35 000—36 000 gamma/ /ml, előnyösen 50 000 gamma/ml legyen. Az- 25 által, hogy ilyen tömény extraktlevet állítunk elő, feleslegessé válik a korábbi eljárásoknál alkalmazott bepárlás és ezáltal az igen érzékeny, polién típusú nystatin lényegesen kisebb mértékben szenved bomlást. S0 Az extrakciót 30—50 C°-on, előnyösen 40 C°on végezzük el. Ilyen extrakciós körülmények között az extrakció hatásfoka 90—92% és, a korábbi eljárások esetében alkalmazott többlépcsős módszer helyett egyszeri extrakció is 35 elegendő. Az extrakciós maradékot szűréssel eltávolítjuk, majd a metanolos szürletet 0—(+10) C°-ra előnyösen (+5)—(+6) C°-ra hűtjük és addig tartjuk ezen a hőmérsékleten, míg a kristályo- 40 sodás szemmel láthatóan megindul. Az első kristálygócok megjelenéséhez 4—6 óra szükséges. Ezután a hűtést megszüntetjük és az elegyet vízzel térfogatának 1,5—3-szorosára, előnyösen kétszeresére hígítjuk. A kristályokat 45 tartalmazó oldat hőmérséklete szobahőfokig emelkedik és az elegyet néhány óráig ezen a hőmérsékleten tartjuk. Fenti feldolgozási módszer eredményeként a korábbi eljárásokkal ellentétben a nystatin közvetlenül kristályos 50 formában válik ki. A vékony, tűszerű hasábok formájában kristályosodó terméket szűrjük, vízzel alaposan átmossuk, acetonban szuszpendáljuk, szűrjük, végül acetonnal mossuk. A termék szárítása vákuumban 30 C°-on történhet. 55 A találmányunk tárgyát képező eljárás előnye, hogy közvetlenül a micéliumból, egyszerű extrakciós módszerrel kristályos nystatint állít elő. Eljárásunk további részléteit a példa tártai- 60 mázza. Figyelembe vett nyomtatványok: magyar sz'ab. 149.132; NSZK szab, 1,016.900. A kiadásért felel: a Közgazdasági 4 Példa: 45 liter, Streptomyces nóursei törzzsel történő fermentáció során kapott fermentlevet (hatóanyagtartalom 4950 /xg/ml, 222,5 g nys:tatin) sűrűn folyó konzisztencia eléréséig szűrünk, Az ily módon nyert nedves micélium súlya 1700 g, víztartalma 70—75%. A mieéliumot 2550 g acetonban szuszpendáljuk, a szuszpenziót szűrjük, 500 g acetonnal mossuk és vákuumban, 45 C°-on szárítjuk, A száraz micélium* súlya 500 g, nystatin-tartalma 44% (220 g). Az acetonos kezelés és szárítás együttes vesztesége 1%. ' A száraz mieéliumot 4000 ml, 2% kalciumkloridot tartalmazó metanollal 1 órán keresztül 38—40 C°-on keverjük, majd az extraktlevet szűrjük. A metanolos oldat 199,5 g nystatint tartalmaz, az extrakció hatásfoka 90,7%. •A metanolos oldatot 5—6 C°-ra hűtjük, a kristályképződés mintegy 4 óra múlva megindul. Ekkor lassan, keverés közben 3950 ml vizet adunk az elegyhez, A kristályosodás 3—4 óra alatt teljessé válik. A kristályokat 1200 ml vízben szuszpendáljuk, 15 perc keverés után a szuszpenziót szűrjük, majd az ily módon nyert kristályokat, 900 ml acetonban szuszpendáljuk és szűrés után 450 ml acetonnal mossuk. Az acetonnedves kristályokat vákuumban, 30 C°on szárítjuk. A termék 157,3 g kristályos nystatin. A kitermelés a száraz micéliumra számítva 71,5%, fermentiere számítva 70,6%. Az ily módon előállított nystatin halványsárga színű, gyógyászati célokra közvetlenül felhasználható kristályos anyag. Biológiai aktivitása 3200 E/mg feletti érték, bomláspontja 160 C°-on kezdődik, /Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás nystatin előállítására fermentációval és az antibiotikumnak a micéliumból való kinyerésével, amelyre jellemző, hogy kristályos nystatint állítunk elő oly módon, hogy önmagában ismert módon szárított mieéliumot olyan mennyiségű kálciumkloridos metanollal extrahálunk, hogy 35 000—60 000 gamma/ml nystatin-tartalmú extraktlevet nyerjünk, az extraktlevet 0—10 C°-ra hűtjük, a terméket víz hozzáadásával kristályosítjuk, majd a kivált kristályokat vízzel mossuk és acetonnal víztelenítjük. 2. Az 1. igénypontban ismertetett eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy az extrakciót 2% kálciumkloridot tartalmazó metilalkohollal végrehajtva nystatin tartalmú extraktlevet áHítuink elő. 3. Az l-*-2. igénypontokban ismertetett eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy az extrakciót 30—50 C-on, előnyösen 38—40 C°-on végezzük el. I §s Jogi Könyvkiadó igazgatója 2 657724. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.