152161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új WG 696 antibiotikum előállítására
152161 7 vízzel nem, vagy csak részben elegyedő szerves oldószerrel, pl. metil-izobutilketonnal, hexánnal, kloroformmal, könnyűbenzinnel vagy hasonlókkal extrahálható a fermentációs léből. Az így kapott kivonat, bepárlása útján nyerjük a nyers WG 696 vegyületet. Ha ezt a terméket vákuumban frakacionált desztillációnak vetjük alá, vagy kromatografáljuk, akkor a folyékony állapotú tiszta vegyülethez jutunk. A kromatográfiai tisztításhoz adszorbensként pl. semleges alumíniumoxid vagy szilikagél, oldószerként . pedig szénhidrogének vagy szénhidrogén-éter elegyek alkalmazhatók. A folyékony halmazállapotú termék, amelyet így nyerünk, még tiszta állapotban is megtartja bizonyos ideig ezt a fizikai alakját szobahőmérséklet körül hőmérsékleteken, minthogy a vegyület eléggé renyhén kristályosodik; így a termék felhasználása kívánt esetben ebben az állapotban is történhet. A találmány szerinti eljárás előnyös kiviteli alakja értelmében azonban könnyen állíthatjuk elő kristályos alakban a WG 696 vegyületet oly módon, hogy a fentemlített bepárlási maradékot frakcionált desztillálás helyett kristályosításnak vetjük alá; a WG 696 vegyület ipari termelése esetén ez az eljárásmód előnyösebbnek tekinthető, minthogy a vegyület magasabb hőmérsékleten többé-kevésbé instabil; már a vákuumdesztilláláshoz szükséges kb. 110—120 C° hőmérsékleten való huzamosabb idejű hevítés is bizonyos, mértékű bomlással járhat. A találmány szerinti eljárásnak egy utóbb említett előnyös kiviteli alakja esetében a WG "696 Vegyületet tartalmazó fermentációs közeget valamely alifás szénhidrogénnel, pl. könnyűbenzihnel extraháljuk, a szerves fázist szárazra pároljuk be, majd a maradékot —10 C° alatti, előnyösen —20 C° és —70 C° közötti hőmérsékletre hűtjük le, amikor is a WG 696 vegyület rövid idő alatt kikristályosodik. A kristályosítást azonban általában előnyös valamely erre alkalmas oldószer, mint pl. szénhidrogén, célszerűen alifás szénhidrogén jelenlétében végezni; az ilyen oldószerekben, pl. 40— 50 C° közötti forrpontú petroléterben a WG 696 alacsony hőmérsékleten kevéssé oldódik. A kristályosítás után a kristályos alakban levált WG 696 vegyületet elkülönítjük és szobahőmérsékleten megszárítjuk. Bizonyos esetekben, pl. amikor az említett bepárlási maradék nem eléggé tiszta, előnyös lehet a fent leírt kristályosítási eljárás megkezdése előtt, a bepárlási maradékot frakcionált desztilláció vagy kromatografálás útján egy többé-kevésbé hatásos mértékű előzetes tisztítási műveletnek alávetni. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. ; *• 1. példa: 300 ml vizes tápközeget alkalmazunk, az alábbi összetételben: glicerin 7,5 g kukoricalekvár (50%-os) 2,5 g glükóz 10,0 g Staley-féle tápanyag * (szójaliszt) 15,0 g MgS04 0,05 g KH2 P0 4 0,06 g FeS04 0,005 g CuS04 0,004 g csapvízzel 1000 ml-re feltöltve. A 300 ml tápközeget egy 2 literes lombikba töltjük, pH értékét 6,5-re állítjuk be, majd 120 C° hőmérsékleten 30 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a lombik tartalmát a Trichoderma viride Leo ND 8 törzs spórázó állapotból kitenyésztett vezetatív. kultúrájával oltjuk be, majd egy 27 C° hőmérsékleten tartott termosztátihelyiségben alternáló mozgású rázóberendezésen rázatjuk. A WG 696 képződését oly módon kísérjük figyelemmel,' hogy a fermentációs közeg kivett és leszűrt mintáit ágár-csészés módszerrel vizsgáljuk, meghatározva a gátlási zónát Candida albicans mikroorganizmussal szemben. 48 órai fermentáció után 300 mcg/ml hozamot érünk el a fermentációs lében. 2. példa: 1000 liter fenti összetételű tápközeget, amelyben azonban a glükóz koncentrációját 5%-ra növeltük, beviszünk egy 1500 liter űrtartalmú, rozsdamentes acélból készült tartályba és 120 C° hőmérsékleten 30 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a tartály tartalmát a Trichoderma viride Leo NB 8 törzs 2,5 liter vegetatív kultúrájával oltjuk be; ezt az inokulumot oly módon nyerjük, hogy a törzset az 1. példában leírt összetételű tápközegen, 27 C° hőmérsékleten alternáló mozgású rázóberendezésen inkubáltatjuk. A fenti félüzemi méretű tartányban a fermentációt 72 óra hosszat folytatjuk 27 C° hőmérsékleten, keverés és óránként 0,6 m3 szellőzés mellett. A fermentáció befejeztével a tápközegben 300 mcg/ml WG 896 volt kimutatható, 8 liter derített fermentációs levet 8,0 pH érlékre állítunk be és 40—50 C° forrpontú petröléterrel kétszer extraháljuk; az összesen 3 liter térfogatú egyesített petroléteres kivonatot 500 ml vízzel mossuk, szárítjuk és szirupsűrűségre bepároljuk, majd vákuumban desztilláljuk. A 0,05 mm Hg-oszlop nyomás alatt 110—112 C° forrpontú frakció, amelynek mennyisége 2,1 g, tiszta WG 696 vegyületből áll. Elemzési adatok: talált értékek: C 69,52°,,; H 8,30° ,,; számított értékek: C 69,83%; H 8,27" „ (C17 H 24 0 4 ) [a\wD = _ii° (1%, kloroformban). Az etanolos oldatban felvett ibolyántúli színkép kb. 205 millimikronnál mutat abszorpciós maximumot (*• = 2400), az, 1%-os széntetratóto-10 15 20 25 30 m 40 45 50 55 60 4
