152120. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hisztaminazoproteinek előállítására
a 15212Ö 4 oldatához csepegtetjük hűtés mellett. Állás után az oldatból 4,5—5,5, célszerűen 4,8—5,2 pH határok között annyi vízzel elegyedő szerves oldószerrel, célszerűen etanollal csapjuk ki a terméket, hogy az oldatban a szerves oldószer koncentrációja 20: —50%, célszerűen 35— 45% közötti legyen. A kicsapott terméket vízzel elegyedő szerves oldószer, célszerűen etanol 20—'50%-os, előnyösen 35—45%-os vizes oldatával mossuk. Szűkség esetén a mosott terméket alkalikus 'közegben vizes oldatba visszük és az előbbiekben leírt kicsapási és mosási műveletet megismételjük. Az így nyert hisztamín-azoprofciwből alkália és konzerválószer hozzáadása mellett a kívánt koncentrációjú oldat készíthető. A [találmány szerinti eljárással nyert hisztamin-azoprotein az ismert eljárás termékével szemben íiziko-Tkémiai vizsgálatok alapján az alábbi előnyös eltéréseket mutatja: — 0,12 mólos dietilbaribitursav puff erben, 8,6-os pH-nál, 1,5 mA és 50 v mellett, mikro-elektroforetizáló készüléken 20 percig elektroforetizálva az ismert termék két csúcsot, a találmány szerinti eljárással nyert termék egy csúcsot mutat, ami a találmány szerinti termék egységességét bizonyítja. — Ultracentrifugás vizsgálatok alapján a-találmány 'szerinti eljárással nyert termék az ismert termékhez képest ugyancsak egységesebbxnek mutatkozik. —; A találmány szerinti eljárással nyert termék tisztasága, szemben az ismert eljárás termiekével fotometriás módszerrel jól ellenőri7.hető. A találmány szerinti eljárás előnyei az ismert eljáráshoz képest a következők: — Az inhomogén szérum helyett a szérumból izolált albumin használata stabilabb, jobban oldható terméket eredményez.. — Az 1,4 :1 p-aminobenzol-azohisiztamin : protein arány 5 :1 fölé történő növelése fokozza a termék hisztamin-antigén hatását. — Az alkoholos ikicsapás, szemben a sósavassal, nem denaturálja a fehérjéket és így elősegíti a termék jó oldékonyságát. — A találmány szerinti eljárással nyert termék jó standardizálhatóságia, szemben az ismert eljárás bizonytalan termékével, lehetővé teszi a hisztarnin-azoprotein oldatának sterilen, stabil készítménnyé történő kiszerelését. Eljárásunk kivitelezését az alábbi példák szemléltetik: 1. példa: 14,7 g p^aminobenzol-azohisztamint 360 ml 3%-os sósavban oldunk. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és hűtés, valamint keverés mellett 641 ml 0,1 normál nátriumnitrit oldattal diazotáljúk. A reakeioelegyet hűtés és keverés közben 420 g'humán albumin 10 liter 0,5 normál dinátriumhidrogénfoszfát és 80 ml normál nátriumhidroxid oldat hozzáadásával készített, Ö C°-ra hűtött oldatához csepegtetjük és a reak' cióelegyet 0 C°-on 1 órán át állni hagyjuk. A reakeioelegyet —4 -7 G° közötti hőmérsék-5 létre hűtve 4,8~*-5,2 pH-nál annyi etanoltadunk hozzá, hogy az elegy etanol koncentrációja 35—45% között legyen. A kicsapódott terméket 35—46%-os vizes etanollal mossuk és elkülönítjük. Szükség esetén újraoldás Után az 10 előbbiekben leírt kicsapási és mosási műveletet megismételjük. 2. példa: 13 2,95 g p^aminobenzol-azohisztamint 72 ml 3%-os sósavban oldunk. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és .hűtés, valamint keverés mellett 128,2 ml 0,1 normál nátriumnitrit oldattal diazotál-20 jük. A reakcióelegvet hűtés és keverés közben 42 g lóalbumin 1000 ml 0,5 normál dinátriumhidrogénfoszfát és 8 ml normál nátriumhidroxid hozzáadásával készített, 0 C°-ra hűtött oldatához csepegtetjük és a reakeioelegyet 0 25 C-on 1 órán át állni hagyjuk. A reakcióefegyet a továbbiakban az 1. sz. példában leírtak szerint kezeljük. 30 3. példa: 4,14 g p-aminobenzol-azohisztamint 102 ml 3%-os sósavban oldunk. Az oldatot 0. C°-ra hűtjük és hűtés, valamint keverés mellett 35 181,1 ml 0,1 normál nátriumnitrit oldattal di. i azotáljuk. A reakeioelegyet hűtés és keverés •közben 21 g nyúlalbumin 500 ml 0,5 normál dinátriumhidrogénfoszfat és 4 ml normál nátriumhidroxid hozzáadásával készült, 0 C°-ra 40 hűtött oldatához csepegtetjük és a reakcióelegyet 0 C°-on 1 órán át állni hagyjuk. A reakeioelegyet a továbbiakban az 1. sz. példában leírtak szerint kezeljük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás hisztamin-azoproteinék előállítás 50 sara H. Pauly-féle dliazo-reakcióval, melyre jelj lemző, hogy reakciókomponensekként legalább 5 :1 mólarányban p~aminobenzol-azohisztamint valamint' szérumból izolált albumint használunk és a keletkezett terméket vízzel elegyedő 55 szerves oldószerrel kicsapva és mosva különítjük el, illetve tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy szérumból izolált albuminként humán-, nyúl-, ló-, marha- vagy 60 tengerimalac albumint használunk. 3. Az. 1—2. igénypontok szerinti eljárás, kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a hisztamin-azoprotein kicsapását és mosását 20—50%, célszerűen 35—45% koncentrációban atakalma-65 zott etanollal végezzük.
