152001. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cianokobalamin-monokarbonsav oszlopkromatografiás elkülönítésére és sómentesítésére
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1963. XI. 14. (GO—906) Közzététel napja: 1964. XI. 23. Megjelent: 1965. XII. 01. 152001 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimái osztályozás: Feltaláló: Dr. Kelemen Ágnes tud. munkatárs Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás cianokobalamin-monokarbonsav oszlopkromatográfiás elkülönítésére és sómentesítésére A találmány tárgya eljárás ciánokobalaminmonokarbonsavak oszlopkromatográfiás elkülönítésére B12 -vitamin savanyú származékaitól, a kromatografálandó vizes oldatnak anioncserélő cellulóz-oszlopra való felvitele, a Bi2 -vitamin 5 vizes mosással való eltávolítása, az oszlopon maradt savanyú B12 -vitamin származékoknak előhívószerrel végzett frakcionált leoldása, és a kapott monokarbonsav-frakció sómentesítése útján. 10 Ismeretes, hogy a cianokobalamin (B12 -vitamin) három monokarbonsav-származéka közül az egyik Escherichia coli 113—3 teszten a B-vitamin kompetitív antagonistája, amit állatkísérletek is igazoltak. Klinikai vizsgálatok sze- 15 rint ez a vegyület terápiásán jól alkalmazható polycythaemia vera kezelésére. Előállítása két úton történhet. Az egyik módszer azon alapszik, hogy egyes, a B12-vitamin előállítására alkalmazott Propionibacterium shermanii törzsek a 20 B12-vitarnin mellett nagyobb mennyiségben cianokobalamin-monokarbonsavat is termelnek. Az előállítás másik módja abban áll, hogy B-vitamint savanyúan hidrolizálnak, és a hidrolízis-termékekből elkülönítik a monokarbonsa- 25 vakat, majd ezek közül az aktív izomert a 151 527 sz. magyar szabadalom szerinti eljárással nyerik ki. Mindkét előállítási eljárás esetében a legfontosabb lépés a cianokobalamin-monokarbonsa- 30 vak elválasztása a semleges B12 -vitamintól és a monokarbonsavaknál savanyúbb származékoktól, így a di- és trikarbonsavaktól. Ismeretes, hogy erre a célra előnyösen alkalmazhatók anioncserélő cellulóz-származékok, így pl. a DEAE-cellulóz (dietilaminoetil-cellulóz) és a trietanolamin, epiklórhidrin és cellulóz reakciójával előállított cellulóz származék, az űn. ECTEOLA-cellulóz. Ezeken vizes sómentes közegben végezve a kromatografálást, a neutrális B12 -vitamin vízzel lemosható az oszlopról, a savanyú anyagok pedig megkötődnek az oszlop tetején. Ez utóbbiaktól a cianokobalamin-monokarbonsavak jól elválaszthatók előhívó oldatként tris(oximetil)-aminometán-HCl puffert használva [K. Bernheuer: J. Chromatography 3, 359 (I960)]. A tris(oximetil)-aminometán-HCl-nek és a saját kísérleteink szerint az elválasztásra alkalmasnak talál puffereknek (borát, acetát) hátránya, hogy nehezen oldható meg a kromatografálással elválasztott cianokobalamin-monokarbonsav sómentesítése, amely sómentesítés feltétlenül szükséges ahhoz, hogy megfelelő tisztaságú végterméket nyerjünk. Különösen nagy nehézséget okoz. az előhívó sókomponens anionjának az elválasztása a gyenge savként viselkedő cianokobalamin-monokarbonsavtól. Megállapítottuk, hogy a sómentesítésre általában, más anyagok esetében alkalmazott oldó-152001
