151985. lajstromszámú szabadalom • Eljárás demetiltetraciklinek előállítására új Streptomyces törzzsel
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1963. XI. 06. Közzététel napja: 1964. XI. 23. Megjelent: 1965. XII. 01. (Cl—480) 151985 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: C 12 k Decimái osztályozás: Feltaláló: Dr. Járai Miklós mikrobiológus Tulajdonos: Chinoin Gyógyszer- és Vegyészeti Termékek Gyára Rt., Budapest Eljárás demetiltetraciklinek előállítására új Streptomyces törzsekkel A demetiltetraciklinek — különösen a demetilklórtetraciklin — felfedezésük óta nagy gyógyászati jelentőségre tettek szert előnyös kémiai és farmakológiai tulajdonságaik alapján. (J. R. D. Mc Cormick és munkatársai: J. Amer. Chem. Soc. 79, 4561, 1957). Előállításuk fermentációs úton történik mutációval kapott Streptomyces aureofaciens (2,878.289 sz. USA szab.), Streptomyces viridifaciens (D. Hendlin és mts.: Biochem, Biophys. Acta 58, 635, 1962.) törzzsel, amely bizonyos százalékban demetiltetraciklineket termel, vagy valamely metilezést gátló vegyület jelenlétében klórtetraciklint termelő Streptomyces törzzsel. (D. Perlaman és mtsai: J. Amer. Chem. Soc. 83, 4481, 1961., és J. J. Goodman, M. Matrishin: J. Bacterid. 82, 615, 1961.). Azt találtuk, hogy demetiltetraciklinek előállíthatók Streptomyces nemzetségbe tartozó törzs levegőztetett szubmerz fermentációja útján előnyösen oly módon, hogy a fermentációt metionin bioszintézisében deficiens törzsek génrekombinációjával előállított prototof törzzsel vagy annak utódjával, variánsával, illetve mutánsával végezzük el. A találmányunk tárgyát képező eljárás alapját az a felismerés képezi, hagy megfelelő biokémiai mutánsokból génrekombinációval prototrof (rekombináns) törzs állítható elő, melyben a tetraciklinek molekulájának Ce helyén a 10 15 20 30 metil-csoport bevitele genetikailag gátolt. Emellett azonban a C6 anyagcsere (metionin-, glicin-anyagcsere, „aktívformaldehid" stb. bioszintézise) nem zavart, hanem teljesen azonos lefolyású, mint egyéb Streptomyces törzseknél; ez például a protein szintézis háborítatlan lefolyásával mérhető. A demetiltetraciklineket termelő törzs előállításához szükséges olyan biokémiai mutánsok képzése, amelyek metilező aktivitása csökkent, azaz a Cx —' anyagcsere folyamatát valamilyen ponton (szakaszban) genetikai blokk akadályozza. Ismeretes, hogy bizonyos metionin-deficiens biokémiai mutánsoknál a tetraciklinek molekulájának C6 helyére a metilcsoport bevitele kisebb aktivitással játszódik le, azaz például a 7-klórtetraciklin mellett 6-demetil-7-klórtetraciklin is keletkezik. (D. Hendline és mtsai: Biochim. Biophys. Acta 58, 635, 1961.) Kísérleteink során számos biokémiai mutánst állítottunk elő (M. Járai: Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung. 8, 73, 1961.), melyeket megvizsgáltunk demetiltetraciklin termelésre. Az eredmények azt mut-v <*-., horrv Vö?ülük több termel kisebb-nagyobb százalékban demetilklórtetraciklint; a N—4 jelzésű metionin deficiens, az N—6 cisztein-argidindeficiens, a N—11 metionin-aminonitrogén deficiens, a N—16 metionin-aszparagin rlofí^wt. és a N—13cisztein-aszparagin deficiens biokémiai mutánsok. 151985
