151921. lajstromszámú szabadalom • Az emberi szervezetre biológiailag hatásos anyagok előállítása állati eredetű proteidekből, különösen proteidhormonokbólkiindulva

151921 3 4 záló hatását azonnal és irreverzibilisen megállítsuk oly módon, hogy a proteidnek vagy hormonnak az enzim okozta hidrolízise csak a kívánt mértékben menjen végbe. A találmány tárgya eljárás az emberre biológiailag hatásos anyagok előállítására az emberre önmagukban közvetlenül hatástalan állati eredetű proteidekből, közelebbről állati proteidhormonokból, nevezetesen állatok hipofízishormonjaiból, például a szomatotróp-horm ónból, ezeknek a proteideknek vagy hormonoknak erre alkalmas proteolitikus enzimek segítségével való hidrolizálása útján. Erre az eljárásra jellemző, hogy úgy járunk el, hogy az enzimeknek az említett proteidekre vagy hormonokra gyakorolt hatását alkalmas inhibitorok segítségével oly módon irányítjuk, hogy a proteidek vagy hormonok hidrolízisét a kívánt fokon irreverzibilis módon megakasztjuk. Az inhibitor az enzimhez kapcsolódva .azt hatástalanítja, ezáltal a kezelt proteid- vagy hormon-molekula hidrolízise irreverzibilisen megakad oly módon, hogy a találmány szerinti eljárással kapott anyag oldatba vitele után és a szervezetbe való befecskendezése pillanatában is biológiailag hatásos marad, és az enzimhatás megszűnésének irreverzibilitása biztosítja, hogy az enzimnek az alapanyagra gyakorolt hatása soha többé nem tér vissza, ennélfogva a kapott anyag nem. veszít a hatásosságából. A találmány szerinti eljárásban felhasználható minden olyan inhibitor vagy inhibítorrendszer, amely képes a kezelt proteid vagy hormon hidrolízisét okozó enzim hatását meggátolni. Az inhibitorok lehetnek kémiaiak, pl. a diizofluorofoszfátok, vagy természetes eredetűek, mégpedig növényiek (például a limabab- vagy a szójabab-inhibitor) vagy állati eredetűek (például az ovomukoid, a hasnyálmirigyből, a fültőmirigyből vagy az orsóféregből (Ascaris) kivont peptidáz-inhibitorok). Nyilvánvaló, hogy ez a felsorolás csak például szolgál, és nem .jelenti a találmány semmiféle korlátozását. Az inhibitor-enzim-komplexumot tetszés szerint el lehet 'távolítani a készítményből vagy benne lehet hagyni, minthogy jelenléte egyáltalán nem változtatja meg sem a termék biológiai tulajdonságait, sem annak reakcióképességét a reakció vagy más, utólagos kémiai művelet(ek) során. A találmány egyik foganatosítási módja szerint egy állati hormont, például a szarvasmarha szomatotróp-hormonját előbb valamilyen enzim, például alfa-kimotripszin hatásának tesszük ki, ez hidrolizálja a hormont, majd a kívánt hidrolizációs fok elérésekor az alfa-kimotripszin enzimhatásának meggátlására az alfa-kimotripszin valamilyen inhibitorát adjuk az anyaghoz. Ilyen inhibitor például a diizofluorofoszfát, a limabab kivonata vagy a hasnyálmirigyből, fültőmirigy. bői vagy orsóféregből (Ascaris) kivont peptidáz-inhibitor. Az említetteken kívül a találmány egyéb intézkedésekre is kiterjed, amelyek kitűnnek az alábbi szövegből. A találmány szerinti eljárás különösen az emberre biológiailag hatásos anyagoknak állati eredetű proteidekből, közelebbről állati proteidhormonokból, nevezetesen hipofizishormonokból, például szomatotróphormonokból való előállítására, továbbá a megvalósítás egyes elemeire és összességére irányul. A találmány megértését megkönnyíti a leírás alábbi kiegészítése, amelyben példákat közlünk az emberi szervezetre biológiailag hatásos anyagoknak állati proteidekből, nevezetesen az emberre közvetlenül nem hatásos állati hipofizishormonokból, például szomatotróphormonokból a találmány szerint való előállítására. Hangsúlyozzuk, hogy az alábbi példák csupán szemléltetésre szolgálnak, és semmiképpen sem jelentik a találmánynak ezekre való korlátozását. Példák: 1. 2 g (40 000 Evans-egység) szarvasmarhából származó szomatotróphormont (egy Evans-egység megfelel 100 g olyan patkánynak, amelynek a hipofízisét kiirtották) feloldunk 95 ml, nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-júra beállított 25 C°-os desztillált vízben. Feloldunk továbbá 4 mg alfa-kimotripszint 5 ml nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-ra beállított 25 C°-os desztillált vízben. A két oldatot összeöntjük, és állandó keverés közben 30 percig 25 C°-on tartjuk. Ezután az oldathoz marhahasnyálmirigyből kivont peptidáz-inhibitort adunk az enzimes hidrolízishez felhasznált alfa-kimotripszin menynyiségéhez viszonyított mennyiségben. Ez ebben az esetben 3 mg kristályos inhibitor. Ezután a készítményt liofilezzük." Az így kapott készítmény 24 000 Evans-egységet tartalmaz; a hozam 60%. 2. 2 g (40 000 Evans-egység) szarvasmarhából származó szomatotróphormont feloldunk 95 ml, nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-júra beállított 25 C°-os desztillált vízben. Feloldunk továbbá 4 mg alfa-kimotripszint 4 ml, nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-ra beállított 25 C°-os desztillált vízben. A két oldatot összeöntjük, és állandó keverés közben 30 percig 25 C°-on tartjuk. Ezután az oldathoz marhafültőmirigyből kivont peptidáz-inhibitort adunk az enzimes hidrolízishez felhasznált alfa-kimotripszin mennyiségéhez viszonyított mennyiségben. Ez ebben az esetben 12 mg inhibitor. Ezután a készítményt liofilezzük. Az így kapott készítmény 24 000 Evansegységet tartalmaz; a hozam 60%. 3. 2 g (40 000 Evans-egység) szarvasmarhából \ származó szomatotróphormont feloldunk 95 ml, nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-júra beállított 25 C°-os desztillált vízben. Feloldunk továbbá 4 mg alfa-kimotripszint 5 ml, nátriumhidrogénkarbonáttal 8 pH-ra beállított 25 C°-os desztillált vízben. A két oldatot összeöntjük, és állandó keverés közben 30 percig 25 C°-on tartjuk. Ezután az oldathoz limababból kivont inhibitort adunk az enzimes hidrolízishez felhasznált alfa-kimotripszirihez viszonyított mennyiségben. Ez 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2