151786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
9 3. példa: Anguidin és monodezacetil-anguidin. Egy fermentorba 10 liter tápoldatot viszünk be, amelynek összetétele a következő: literenként 20 g gülkóz (Cerelose Sandoz), 2 g pepton (Cudahy), 2 g malátakivonat (Schweiz. Ferment A. G.), 2 g Bacto-yeast Extract (Difcogyártmányú élesztőkivonat), 2 g káliumdihidrogénfoszfát, 2 g MgS04 • 7H2 0, iontalanított vízzel feltöltve. Ezt a tápoldatot a Fusarium sambucinum ATCC 11 852 törzs kultúrájával beoltva, keverés (450 fordulat percenként) és szellőzés (5 liter levegő percenként) mellett 145 óra hosszat inkubáltatjuk 27° hőmérsékleten. A kapott sötétvörös színű fermentációs levet leszűrjük és a szüredéket a megadott sorrendben 3X10 liter benzinnel, 3X10 liter etilacetáttal és 3X10 liter n-butanollal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot 2 liter vízzel mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepáiiási maradékot kloroformban oldjuk és 4,18 g kovasavgélen kromatografáljuk. A kloroformmal eluált részeket kiselejtezzük. A kloroform és . metanol 199 :1 arányú elegyével eluált frakcióból, éter és hexán elegyéből történő kristályosítás után kristályos anguidint kapunk. A kloroform és metanol 1 : 1 arányú elegyével eluált frakcióból vékonyrétegű kromatografálással kimutathatjuk a monodezacetil-anguidint. 4. példa: Anguidin és monodezacetil-anguidin. A Fusarium scirpi S 1497 törzsének kultúráját 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban az 1. példában megadott összetételű, de „Bacto yeast extract (Difco)" hozzáadása nélkül készült tápoldat 100—100 ml-jében 25 napig inkubáltatjuk 27° hőmérsékleten. 37 ilyen kultúrából a micéliumot kiszűrjük és a kultúra szüredéket 3X2 liter etilacetáttal extraháljuk. A kivonatokat kevés vízzel mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Az így kapott maradékot 30 g kovasavgélen kromatografáljuk. A benzollal és kloroformmal eluált részeket kiselejtezzük. A kloroform és metanol 199 : 1 arányú elegyével eluált frakcióból, éter és hexán elegyéből történő kristályosítás után 155—162°-on olvadó kristályos anguidint kapunk. A kloroform ' és metanol 199 : 1 arányú elegyével eluált frakciókból vékonyrétegű kromatográfiai módszerrel kimutatható a monodezacetil-anguidin. 5. példa: Anguidin. A Fusarium scirpi S 1497 törzsének kultúráját egy fermentorban (Typ FS 307) a 2. példában leírt tápoldat 5 literjében, keverés (300 fordulat percenként) és szellőzés (5 liter levegő 10 percénként) mellett 144 óra hosszat inkubáltatjuk 27° hőmérsékleten. A termék feldolgozása a 9. példában leírt módon történik; végtermékként kristályos an-5 guidint kapunk. 6. példa: Monodezacetil-anguidin. 10 A Fusarium anguioides • NRRL 3020 törzsének kultúráját fermentorban, 10 liter oly tápoldatban, amely literenként 30 g glükózt (Cerelose Sandoz), 2 g malátakivonatot (Schweiz. Fer-15 ment AG.), 2 g élesztőkivonatot (Bacto yeast extract, Difco), 4 g p. a. ammóniumnitrátot, 2 g p. a. káliumdihidrogénfoszfátot, 2 g p. a. magnéziumfoszfátot (7H.,0), 28 mg vas(IÍ')-szulfátot (7H20, p. a.), 3 mg cinkszulfátot (7H 2 0, 20 p. a.), iontalanított vízzel elkészítve tartalmaz, keverés (1450 fordulat percenként) és szellőzés (5 liter levegő percenként) közben 135 óra hoszszat inkubáltatjuk 27* hőmérsékleten. A kapott fermentációs levet egy poharas centrifugában 25 centrifugálva, különválasztjuk a szilárd iszapot a gyengén zavaros oldattól. A szupernatáns oldat 7,0 literjét ugyanolyan térfogatú etilacetáttal kétszer, majd ugyanolyan térfogatú n-bu~ tanollal háromszor extraháljuk. A szerves oldó-30 szereket vízzel 2—2 ízben mossuk és keringtető bepárlóban külön-külön bepároljuk őket. Az etilacetátos kivonatból nagyvákuumban történő alapos szárítás után visszamaradó maradékot 100 ml petroléter és 100 ml 90%-os vizes 35 metanol között megosztásnak vetjük alá, majd ezt a műveletet még egyszer megismételjük. A metánolos vizes kivonat bepárlása és megszárítása útján kapott maradékot kovasavgélen a szokásos módon kromatografáljuk. A kloro-40 form és metanol 199 : 1 arányú elegyével eluált frakciók aguidint taralmaznak; két oly frakcióból, amelyeket kloroform és metanol 49 : 1 ' arányú elegyével eluáltunk, , éterből történő kristályosítás után tiszta kristályos monodezace-45 til-aguidint nyerhetünk. 7. példa: Monodezacetil-anguidin előállítása anguidinból. 50 102 mg anguidint 5 ml metanolban oldunk és az oldathoz 5 ml 1%-os vizes káliumhidrogénkarbonát-oldatot adunk. Az elegyet 5 napig hagyjuk 30° hőmérsékleten állni, majd ugyan-55 ilyen hőmérsékleten fele térfogatra pároljuk be és az így kapott koncentrátumot kloroformmal 16 óra hosszat folytonosan extraháljuk. A kloroformos fázist nátriumszulfáton szárítjuk, leszűrjük és bepároljuk. Az így kapott bepár-60 lási maradékot 5,0 g kovasavgélen kromatografáljuk. Eluálószerként kloroformot alkalmazunk, növekvő mennyiségi arányú metanol hozzáadásával. Elsőzör az anguidint eluáljuk (1% metanol-adalék), majd a monodezacetil-angui-65 dint (2—5% metanol-adalék), végül pedig az 5
