151785. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lizergsavszármazékok előállítására
5 151785 6 2. Alkaloidtartalom minden esetben 1 mg/l FeS04 • 7H2 0 ZnS04 • 7H2 0 mg/l alkaloidtartalom mg/l 0 8 1 1060 15 985 60 950 Ezt a tápoldatot egy 3 napos előkultúra 10%.nyi mennyiségével beoltjuk és 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban, 100 ml-es adagokban 23 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk egy reciprokrázógépen. Más kultúrákat a fent leírthoz hasonló módon, de rozsdamentes acélból készült, 170 liter tápközeget tartalmazó fermentorokban tenyésztünk. Ezeket percenként 170 liter levegővel szellőztetjük és kezdetben percenként 70, később percenként 180 fordulattal keverjük. A habzás leküzdésére szilikon-emulziót alkalmazunk. A fent leírt módon kapott kultúrák nagyszámú, egyforma micélium-részecskékből állnak. Ezek átmérője kb. 5 mm; a részecskék egy kb. 1 mm átmérőjű, pszeudo-parenchymás szövetből álló gömbálakú tömör magot tartalmaznak. Ez a mag párhuzamosan fekvő hyphákból álló kb. 2 mm hosszú nyúlványokat hordoz csillagszerű elrendezésben. A kb. 10 napos tenyésztési időszak végén a micélium sötétbarna, a fermentációs lé szüredéke pedig élénk vörösesbarna színű. A pH-érték csupán lényegtelen mértékben változik. A fenti módon kapott kultúra-szüredék pl. az alábbi módon dolgozható fel: A kultúra-szüredék 20 literes adagját kb. 1,2 kg szódával 9,75 pH-értékre állítjuk be, majd 20—20 liter etilénkloriddal háromszor extraháljuk. A szerves fázist mindenkor egy ízben 5 liter vízzel mossuk, majd vákuumban összesen 4 liter térfogatra töményítjük be. A kapott koncentrátumot háromszor extraháljuk 1—1 liter 5%-os borkősavval, a borkősavas kivonatokat szódával 9,0 pH-értékre állítjuk és 2—2 liter etilénkloriddal háromszor extraháljuk. A kevés vízzel mosott és nátriumszulfáton szárított etilénkloridos kivonatokból vákuumban történő bepárlás után 16,7 g báziselegyet kapunk, amely van Urk szerint vizsgálva 12,2 g indol-származékot, papírkromatográfiai módszerrel vizsgálva pedig 11,3 g elszappanosítható indol-tartalmat mutat. Az így kapott bázis-elegyet a fentebb leírt módon papírkromatográfiai módszerrel elemeztük; a termék az alábbi összetételt mutatta: 1 lizergsavamid 45% izolizergsavamid 42% ergobazin 3% ergobazinin 3% chanoklavin 3% elimoklavín 2%) penniklavin 2% A fermentoros kultúrából 12 napi tenyésztés után 145 liter kultúra-szüredéket kapunk. Ezt a kultúra-szüredéket 2 n nátronlúggal meglúgosítva, 7,4 pH-értéken 200—200 liter etilacetáttal ötször, majd 10 pH-értéken 200—200 liter etilacetáttal háromszor extraháljuk. A két etilacetátos kivonatot 10—10 liter térfogatra pároljuk be és az így kapott koncentrátumokból vizes borkősavoldattal kivonjuk az alkaloidokat. A vizes borkősavas kivonatokat meglúgosítva ismét 7,4 és 10 pH-értéken extraháljuk etilacetáttal, majd az etilacetátos kivonatokat kevés vízzel semlegesre mossuk és szárazra bepároljuk. A kivonatok bepárlási maradékát a fentebb leírt módon papírkromatográfiai módszerrel elemezve, az alábbi összetételt tapasztaljuk: lizergsavamid 66% izolizergsavamid 21% ergobazin 4% ergobazinin 2% chanoklavin 2% elimoklavin 2% agroklavin 2% penniklavin 1%. A Claviceps paspali Stevens et Hall új törzsének felhasználásával lefolytatásra kerülő találmány szerinti eljárás további előnye, hogy a kapott alkaloidelegy különösen gazdag lizergsavamidban, ill. izolizergsavamidban. E két vegyület ugyanis, a természetes anyarozs-alkaloidokkal, pl. az ergobazinnal szemben lényegesen könnyebben hidrolizálható szabad lizergsavvá, amely azután értékes közbenső termék további nagyhatású gyógyszerek szintéziséhez. Ezt a hidrolízist kívánt esetben közvetlenül, az alkaloidelegynek a kultúra szüredékéből történő elkülönítésével egy munkamenetben is lefolytathatjuk, pl. a következő módon: 16,7 g fenti eljárással kapott nyers alkaloídelegyet 50%-os etanolban oldunk és az alkalikus oldatot 75 g báriumhidroxid és 2 g nátriumditionit hozzáadása után 3V2 óra hosszat forraljuk visszafolyató hűtő alatt. A lehűlt reakcióelegyhez 16 ml tömény ammóniumhidroxidot és 218 ml 2 n kénsavoldatot adunk. Ezután a képződött csapadékot centrifugálással elkülönítjük. A szilárd maradékot még ötször szuszpendáljuk 200—200 ml meleg, 9 :1 arányú metanol-ammónia elegyben. Az eredeti szüredéket egyesítjük ezekkel a metanolos-ammóniás mosófolyadékokkal és vákuumban bepároljuk. A nyers lizergsavat jégecettel kicsapjuk, majd 75 ml metanol és 75 ml 2 n nátriumhidroxidoldat elegyével felvéve, 33 ml jégecettel ismét kicsapjuk. A nyers lizergsav hozama 6,5 g. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a lizergsav amidszerű származékainak előállítására, azzal jellemezve, hogy a Claviceps paspali Stevens et Hall NRRL 3027 nyilvántartási számú új törpét előbb ágár-táp-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 s
