151698. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új nonapeptidamid előállítására

7 151698 8 Vesszük. Az etilacetátos oldatot elkülönítjük, vízzel, majd n-sósav oldattal, azután vízzel és utána 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, végül pedig ismét vízzel gondosan mossuk, majd nátriumszulfáton szárítjuk. Az oldat bepárlása és petroléter hozzáadása után kikristályosodik a nyers dipeptidészter; op. 179—180°. Ezt a terméket tisztítás céljából kétszer átkristályosítjuk etilacetát és petroléter elegyéből; ily módon 180,5—181,5°-on olvadó termékhez jutunk; \O\D = +3,9° í(c = 5 dimetilformamidban). A termék benzol/aceton 7 :3 oldószerrendszerben végzett vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik. Kimutatás: klór-módszer. b) L-izoleudl-iL-szerin-L-metilészter-hidroklorid: 26,0 g (71 millimól) N-karbobenziloxi-L-izoleucil-L-szerin-metilésztert 380 ml metanol és 6,25 ml tömény sósav elegyében oldunk és 5 g palládiumos aktívszén j(ílO% Pd) jelenlétében hidrogénáramban addig hidrogénezzük, míg több széndioxid már nem fejlődik. A katalizátor kiszűrése után a reakcióelegyet vákuumban szárazra bepároljuk, a maradékot pedig metanol és éter elegyéből kétszer, majd metanol, aceton és éter elegyéből egyszer átkristályosítjuk. A termék 203—204°-on bomlik, [a]'ft = +12,6' (c = 3,01 metanolban). A termék vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik az n-butanol/j égecet/víz 3:1:1 és metiletilketon/piridin/víz 65:5: 20 rendszerekben. Kimutatás: klór-módszer, ninhidrin-módszer. c) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-szerin-metilészter: 3,55 g i(13,2 millimól) L-izoleucil-L-szerin-metilészter-hidrokloridot szobahőmérsékleten oldunk 30 ml dimetilformamidban, az oldatot 0° hőmérsékletre hűtjük, majd 1,85 ml (13,2 millimól) trietilamint adunk hozzá és 10 percig többszöri felrázás közben állni hagyjuk. Ezután a levált trietilamin-hidrokloridot leszűrjük ^es 5 ml . dimetilformamiddal utánamossuk. A szabad dipeptidészter oldatához hozzáadjuk 6,98 g (13,2 millimól) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozin [előállítva V. DuVigneaud, M. F. Bartlett és A. Johl, J. Am. Chem. Soc. 79, 5572 (1957) szerint] 35 ml acetonitrillel készített oldatát. A kapott tiszta reakció oldatot —10° hőmérsékletre hűtjük. 2,72 g (13,2 millimól) N,N'-diciklohexil-karbodiimid hozzáadása után rövid idő múlva ;N,;N'-diciklohexil-karbamid es a tetrapeptidészter kezdenek kiválni. Az elegyet 55 óra hosszat keverjük —10° hőmérsékleten, majd a levált termékeket leszűrjük, kevés dimetilformamid-acetonitril l('l : 1) eleggyel és azután acetonitrillel mossuk hidegen. Az N,N'-diciklohexil-karbamid eltávolítása céljából a nyers terméket 80 ml dimetilformamiddal felvesszük és 2 óra hosszat 0° hőmérsékleten tartjuk. A karbamidot kiszűrjük és a reakcióterméket a szüredékből 700 ml meleg etilacetát hozzáadásával lecsapjuk. Metanolból történő 5 háromszori átkristályosítás után a kapott S,N'védett tetrapeptidészter a vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik a benzol/aceton 1:1, kloroform/metanol/l 7%-os ammónia ,2:2:1 és n-butanol/j égecet/víz 3:1:1 10 rendszerekben. Kimutatás: klór-rendszer és Folin-rendszer. A termék 210°-on zsugorodik és 219—221°-on olvad; HD=— 59,5° (c = 0,9"9 hangyasavban), [a] a = —16,2° <c = 0,98 piridinben). d) S-benzil^N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleueil-L-szerin-hidrazid: 20 5,57 g i(7,5 millimól) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-Lr-izoleucil-L-szerin-metilésztert 0° hőmérsékletre hűtjük, 4,5 ml hidrazinhicTratot (92,2 millimól) adunk hozzá és 45 óra hosz-25 154 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot szat hagyjuk állni 0° hőmérsékleten. A reakcióelegyhez ezután erős jéghűtés közben 400 ml jeges vizet adunk. A reakciótermék ennek során kocsonyás csapadék alakjában kiválik. Jég-30 szekrényben 2 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük a nyers hidrazidot, vízzel alaposan mossuk és vákuumban foszforpentoxid felett megszárítjuk., A kapott .nyers terméket tisztítás céljából két-35 szer átkristályosítjuk dimetilformamid és acetonitril elegyéből. A kapott termék 222°-on zsugorodik, 226—2'29°-on pedig bomlás közben olvad; [a] %' =—69,2° í(c = 1,79 hangyasavban;, 40 23 o [<f]o = +7,2 (c = 1,99 dimetilformamidban). A termék vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik az n-butanol/j égecet/víz 3:1:1 és metiletilketon/piridin/víz 45 65 : 5 : 20 rendszerekben. Kimutatás: klórmódszer és Folin-módszer. e) N-terminális tetrapeptid-azid: 50 íS-benzil-iN-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucíl-L-szerin-azid ' 0,966 g í(l,3 millimól) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-szerin-hidrazidot 35 55 ml dimetilformamid és 3,9 ml n-sósav oldat elegyében oldunk, az oldatot —10° hőmérsékletre hűtjük és lassan hozzáadunk 0,29 ml 5 n nátriumnitrit-oldatot. Az elegyet 10 percig keverjük, majd az azidot —8° és —5° közötti hő-60 mérsékleten 45 ml jeges víz hozzáadásával kicsapjuk. A kapott kocsonyás csapadékot leszívatjuk, hideg vízzel, majd 3%-os nátriumhidrógénkarbonát oldattal, azután ismét hideg vízáfel alaposan mossuk és nagyvákuumban 0° hőmér-65 sékleten 4 óra hosszat szárítjuk. A termék 244— 4