151580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta4-3-keto-szteroidok előállítására mikrobiológiai úton
3 az átalakítás nem történik meg. Meglepő módon kivitelezhető ez az átalakítás is úgy, ha a tenyészetet előzőleg valamely észter-csoportot tartalmazó vegyület jelenlétében (pl. Reichsteinféle S-vegyület 21-acetátja) adaptáltatjuk. A vízzel nem elegyedő szerves oldószerből csak a vizes fázis telítéséhez szükséges mennyiség adagolható, mivel abban az esetben, ha a vízzel nem elegyedő szerves oldószer külön fázist alkot, az átalakulás nem történik meg. Az általunk felfedezett Streptomyces K—451 jelzésű törzs a szteroidok zls -3 ^-oxi-szerkezetét képes ZÍ4 -3-keto-szerkezetté átalakítani. így törzsünk dehidroepiandroszteront zl4 -androszténdinná, metilandroszténdiolt metiltesztoszteronná, pregnenolont progeszteronná, ,/|5 ' 16 -pregnadienolont zl16 -dehidro-progeszteronná, 16 «, 17«-oxido-pregnenolont 16a,17°-oxido-progeszteronná, 17« 21-dioxipregnenolont Reichstein-féle S-vegyületté alakít át jó kitermeléssel. Az alkalmazott vízzel nem elegyedő szerves oldószer bármely apoláros oldószer lehet (például: etiléter, butilacetát, toluol, benzol, diklóretán, triklóretilén, metil.énklorid, kloroform, széntetraklorid, illetve ezek keveréke). Kísérleteink szerint a vízzel nem elegyedő szerves oldószerek közül a minél kisebb mértékben poláros jellegűek használata a legelőnyösebb, a poláros jelleg növekedésével viszont csökken a mikrobiológiai átalakítás hatásfoka. Ezért eredményeink több okból nem voltak előreláthatóak, sőt igen meglepőnek minősülnek. Ezek az okok a következők: Az általunk felfedezett Streptomyces K—451 jelzésű törzs az ismert Flavobacteriumoktól rendszertanilag igen távol áll s az ilyen jellegű átalakításokra képes mikroorganizmusoknak egy merőben új csoportját képviseli, illetve. nyitja meg. Az eddigi ismeretek szerint a szerves oldószerek jelenléte a mikrobiológiai átalakítások során a sejtek életműködését és az enzimek tevékenységét általában károsan befolyásolja olyannyira, hogy az ilyen oldószerek használatától ez ideig az átalakítások során tartózkodni volt ajánlatos. A Streptomyces K—451 jelzésű törzszsel kapcsolatban azt a elméleti és gyakorlati szempontból egyaránt nagy fontosságú felfedezést tettük, hogy a dezacetilező enzim adaptív természetű, az adaptációt pedig meg lehet gátolni vízzel nem elegyedő oldószerek adagolásával úgy, hogy az átalakítást végző 3 ß~oxi-szteroid-dehidrogenáz és A5 -» zf 4 -szteroid-izomeráz enzimek, továbbá a már kialakult szteroid-észterázok nem károsodnak s működésük nincs gátolva. A Streptomyces K 451 jelzésű mikroorganizmus szintetikus táptalajokon lassan induló, komplett, természetes táptalajokon gyorsan kezdődő jó növekedést mutat. Jó növekedés esetén sárga vagy sárgásbarna oldódó pigmentet termel, ilyenkor a vegetatív micélium színe is sárga vagy sárgás. A spórásodó légmicélium színe fehér, a spórahordozók általában párosá-4 val helyezkednek el és a biverticillus sectiora jellemző alakúak. Az alább részletezett vizsgálat alapján az organizmus a Pridham T. G., Wesseltine C. W. és Benedict R. G.-féle osztá-5 lyozás szerint a biverticillus sectio fehér sorozatába tartozik. [Appl. Microbiol. 6, 54 (1958)]. Az organizmus növekedését különböző táptalajokon vizsgálva a következő eredményeket kaptuk: Szaharózos Czapek-agaron; 28 C°-on: lassan 10 induló gyenge növekedés, a spórásodó légmicélium színe fehér. Glükóz aszparaginos agáron, 28 C°-on: lassan meginduló jó növekedés, a spórásodó légmicélium fehér, a mikroorganizmus gyengén 15 sárga, oldódó pigmentet termel. Glicerin-káliumnitrát agáron, 28 C°-on: lassan meginduló jó növekedés a spórásodó légmicélium fehér, a mikroorganizmus gyengén sárga oldódó pigmentet termel. 20 Kálcium-malát agáron, 28 C°-on: lassan meginduló közepes erősségű növekedés, a spórásodó légmicélium színe fehér. Kálcium-malát glicerines agáron, 28 C°-on: lassan meginduló közepes erősségű növekedés, a spórásodó légmi-25 célium színe fehér, a mikroorganizmus gyengén sárga oldódó pigmentet termel. Tirozinos agáron, 28 C°-on, szúrási tenyészetben: közepes erősségű növekedés, spórásodó légmicélium alig termelődik, a vegetatív micé-30 lium színe sárga. Liebig-pepton-agaron, 28 C°-on: jó növekedés, barna pigment képzés. Keményítős agáron, 28 C°-on: gyenge növekedés, spórásodó légmicélium színe fehér. 35 Keményítős káliumnitrát-agaron, 28 C°-on: lassan meginduló közepes erősségű növekedés, a spórásodó légmicélium színe fehér. Glükózos burgonyáié agáron, 28 C°-on: jó növekedés, a spórásodó légmicélium termelése lassan indul 40 meg, színe fehér, a mikroorganizmus barna, oldódó pigmentet termel. Emerson-agaron, 28 C°-on: jó növekedés, a spórásodó légmicélium termelés lassan indul meg, a színe fehér, a mikroorganizmus barnás 45 sárga, oldódó pigmentet termel. Zablisztes-agaron, 28 C°-on: lassan meginduló közepes erősségű növekedés, spórásodó légmicélium gyengén termelődik, a színe fehér, a mikroorganizmus gyengén termel sárga 50 oldódó pigmentet. Loefíler-féle szérumon, 28 C°-on: jó növekedés, spórásodó légmicélium gyengén termelődik, a színe fehér, a mikroorganizmus barna, oldódó pigmentet termel és gyengén folyósít. 55 Burgonya-szeleten, 28 C°on: lassan meginduló közepes erősségű növekedés, spórásodó légmicélium alig termelődik, a színe fehér, a mikroorganizmus barna, oldódó pigmentet termel. 60 Plotho-agaron, 28 C°-on: lassan meginduló jó növekedés, spórásodó légmicélium jól termelődik, a színe fehér, a mikroorganizmus sárga, oldódó pigmentet termel. Kellner—Morton-agaron, 28 C°-on: jó nö-65 vekedés, spórásodó légmicélium gyengén ter-2
