151405. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum kinyerésére és tisztítására

5 151405 6 I. táblázat 3410 ne 1066 ngy 2930 e 1043 k l(vk) 1713 e 1004 ne 1632 k 976 vk 1578 e 943 ngy 1380 e 885 k 1298 k 860 ngy 1269 e 842 k 1229 ngy 803 gy 1176 e 790 gy 1130 vk 740 ngy 1107 körül, vk 712 ngy ne = nagyon erős e = erős • fc = közepes gy = gyenge •ngy = nagyon gyenge vk = váll-képződés. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példa szemlélteti ; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre nincsen erre a példára korlátozva. A példában leírt műveletek során, az antibiotikus aktivitás meghatározása diffúziós módszerrel történt, Pestalozzia palmarum törzset alkalmazva érzékeny mikroorganizmusként; összehasonlító mintául az antibiotikum tiszta kristályosított imintája szolgált. Az antibiotikus aktivitásit a,kristályos tiszta antibiotikum mikrógramm jában (meg), 1 mg anyagra vonakoztatva fejeztük ki. Példa: 515 g nyers antibiotikumot, amelyet a törzsszabadalom 1. példájában leírt módon nyertünk és amelynek antibiotikus aktivitása 370 mcg/mg, 8 liter 9 pH-értékre lűgosított víziben oldunk. A kapott vizes oldatot 4 pH-értékre savanyítjuk, majd előbb 8 liter, majd 2 liter 95 : 5 tf. arányú kloroforin-butanol eleggyel extraháljuk. A kapott szerves fázisokat egyesítjük és csökkentett nyomás alatt, 40 C° alatti hőmérsékleten, 2,5 liter térfogatra pároljuk bé. Azután a desztil'lációt állandó térfogalt mellett, bútanol hozzáadásával folytatjük, a kloroform teljes elűzéséig. A kapott oldathoz azután 2,5 liter 90 :10 tf. arányú aoetönvíz elegyet adunk és utána 20 óra hosszat állni hagyjuk 37 C° hőmérsékletén. A képződött kristályokat leszívatjuk, 0,5 liter 50 : 50 tf. arányú butanol-aceton eleggyel, majd 0,5 liter acetonnal keverve mossuk, végül 2 mm ,Hg-oszlop nyomás alatt, 40 C° hőmérsékleten, 12 óra hosszat szárítjuk, Ily módon 150 g terméket kapunk, 640 mcg/mg aktivitást mutató barnás színű kristályok alakjában. Ezeket a kristályokat 1,5 liter 80 : 20 tf. arányú kloroform-fenol elegyben oldjuk és a kapott oldatot szűrési segédanyag jelenlétében leszűrjük. A szüredékhez 1,5 liter butanolt adunk, 5 majd az elegyet csökkentett nyomáson, 40 C° alatti hőmérsékleten 1,1 liter térfogatra pároljuk be. A maradékhoz keverés közben 6 liter 98 :2 tf. arányú aoetönvíz elegyet adunk, a kapott oldatot azután először szűrési segédanyag 10 jelenlétében szűrjük, majd pórusos zsugorított üveglapon át újból leszűrjük. A szüredéket 37 C° hőmérsékleten 20 óra hosszat állni hagyjuk; a képződött kristályokat leszívatjuk, 0,5 liter acetonnal, majd 0,5 liter 50 :50 ttf. arányú bu-15 tanol-dimetilszuMoxid eleggyel, végül pedig 0,7 liter acetonnal mossuk, azután 2 mm Hg-oszlop nyomás alatt, 40 C° hőmérsékleten 12 óra hosszat szárítjuk. Ily módon 65 g terméket kapunk, 903' mcg/mg aktivitást mutató fehér kris-20 tályők alakjában. Az anyalúgok és a mosófolyadékok egyesítése útján kapott oldatot 48 óra hosszat hagyjuk 32 C° hőmérsékleten állni, amikor is 68 g mennyiségű második kristálygenerációt kapunk, amelynek aktivitása 475 25 mcg/mg. 48 g fenti módon kapott, 903 mcg/mg aktivitású kristályos terméket egy liter vízben szuszpendálunk és e szuszpenzió pH-értékét 40 30 ml n nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával 10,4-re állítjuk be, majd szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük. A szuszpendált kristályok mikroszkópos vizsgálata útján megállapítható, hogy ezalatt a kristályok kristályalaik változása 35 már befejeződött. A szuszpenzió pH-értőkét ezután n sósavoldat lassan történő hozzáadása útján 7,3-ra állítjuk be, majd szobahőmérsékleten egy óra hosszat keverjük a szuszpenziót. A képződött kristályokat ezután leszivatással elkülö-40 nítjük, majd 250 mii vízzel, ezt követően pedig 500 ml acetonnal mossuk, végül pedig megszárítjuk a kristályos terméket. Ily módon 42 g mennyiségben kapjuk a tiszta 9971 ,R. P. antibiotikumot, fehér színű, apró tűkristályok alak-45 jában; e tiszta termék l'OOÖ mcg/mg aktivitást mutat. ', Szabadalmi igénypont: 30 A 150.865 lajstromszámú törzsiszabadalom igénypontja szerinti eljárás továbbfejlesztése a nyers 9971 R. P. antibiotikum tisztítására, azzal jellemezve, hogy az alábbi műveleteket vé-55 gezzük, adott esetben az eljárás alábbi három szakaszának bármelyikét a kívánt tisztítási hatásfok mértékének megfelelően egyszer vagy többször megismételve: a) a nyers antibiotikumot alkalikus vizes ol-60 datból klórozott szerves oldószerrel, amelyhez valamely vízzel nem. elegyedő alkoholt is adtunk, extraháljuk, majd a kapott kivonatot a klórozott oldószer eltávolításáig bepároljuk és ' az antibiotikumot vizes aceton hozzáadásával 65 lecsapjuk; 3