151403. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására
Í51403 nemnek a Bergey's Manual-ban leírt jellemző tulajdonságaitól: a) zöldesszürke vagy zöldesbarna pigmentet termel, amely a glükózt és lefölözött tejet tartalmazó ágáros táptalajon tenyésztett kultúrák vegetatív micéliumainak egy részét, vagy többé kevésbé az egészet színezi; b) a burgonya-kultúrán szürkésbarna vagy feketósibarnától olívbarnáig terjedő színeződés képződik, amely a burgonyát is elszínezi; c) ellentétben a Waksman és Henrici által leírt Siterptomyees griseus törzzsel,, a Streptomyces griseus 20 129 a nitrátokat nem redukálja nitritekké. -Pridham és Gottlieb (J. of B act 56, 107—114, 1948) módszerével megállapítottuk, hogy a Streptomyces griseus 20129 szénforrásként a következő anyagokat képes hasznosítani: xilóz, arabinóz, glükóz, galaktóz, levulóz, mannóz, maltóz, trehalóz, cellolbióz, dextrin, keményítő, glikogén,, glicerin, adonit és mannit. Nem képes hasznosítani a következőket: rammóz fukóz, szorbóz, szacharóz, raffinóz, inulin, eritrit, dulcit, szoirbit és mozit. [Nitrogénforrásként a Streptomyces griseus 20 129 a következő anyagokat hasznosítja: ammóniumszulfát, adenin, adenozin, karbamid, aszparagin, glikokoll, alaniiij valin, glutaminsav, arginin, lizin, treonin, metionin, fenilalanin, tirozin, prolin és hisztidin. Nem hasznosítja a következőket: nátriumnitrát, nátriumnitrit, uracil, acetamid, kreatin, fcreatinin, taurin, szarkozin és hidroxiprolin. Ali 072 R. P. antibiotikum új előállítási eljárásának lényege az, hogy a Streptomyces griseus 20129 törzset valamely erre alkalmas táptalajon megfelelő körülmények között szaporítjuk, majd a tenyésztés során képződött antibiotikumot elkülönítjük. A Streptomyces griseus 20129 törzsnek a 11972 R. P. antibiotikum termelése céljából történő tenyésztése során ugyanolyan általános feltételek mellett dolgozunk és a képződött antibiotikumnak a fermentációs levekből történő elkülönítésére ugyanazokat a különféle módszereket alkalmazzuk, amilyeneket a fent idézett korábbi szabadalmunkban all 072 R. P. antibiotikum Streptomyces caelicus kultúrájával történő előállítására vonatkozólag leírtunk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példa szemlélteti; megjegyzendő azoniban, hogy a találmány köre egyáltalán nem korlátozódik erre a példára. A példában megadott aktivitásokat diffúziós módszerrel határoztuk meg; Sareina lutea szolgált e meglhatározásokfeoz érzékeny mikroorganizmusként, összehasonlító mintáként pedig a termék egytiszta kristályos mintáját alkalmaztuk. Az aktivitásHértékeket szilárd termékek esetélben a termék 1 mg-jára vonatkoztatva, a kristályos minta meg-j álban, oldatok esetében pedig az oldat 1 ml-jére vonatkoztatva, ugyancsak a kristályos minta mcg-jában fejeztük ki. Példa: , Egy 170 literes fermentorban az alábbi anyagokat adagoljuk be: 5 pepton 1,200 kg húskivonat 0,600* kg glükózdhidrát 1,200 kg vízvezetéki vízzel feltöltve 100 literre. 10 Az így kapott táptalaj pH-értékét 110 ml tömény nátriumhidroxid-oldattal 6,95-re állítottuk be. A táptalajt gőzbevezetés útján 122 C° hőmérsékleten 40 percig sterilizáltuk. 26—27 C° hőmérsékletre való lehűlés után a táptalaj. tér-15 fogatát 120 literre, végső pH-értékét pedig 6,60-ra, állítottuk be. Ezután a táptalajt beoltottuk a Streptomyces griseus 20129 törzs rázott Erlenmeyer-lonibikban tenyésztett 200 ml kultúrájával. A férmen toriban tenyésztett kultúrát 20 steril levegővel, óránként 5 m3 áramlási sebesseggel levegőztettük és 250 percenkénti fordulatszámú turbinás keverővel kevertük. A hőmérsékletet 26 e°-on tartottuk. A tápközeg pH-értéke a fermentáció első 16 25 órája folyamán 6,40 és 6,60 között marad, azután emelkedik és 24 óra élteltével eléri a 7,50 értéket. A gomba fejlődése a 20. óra körül válik láthatóvá. Gélszerű, ha ezt a tenyészetet a beoltásután 27 órával oltjuk át a termelő 30 kultúrába. A termelő kultúrát egy 800 literes fermentorban tenyésztjük; a fermentorba az alábbi anyagokat visszük be: 35 40 45 50 55 60 65 szójaliszt 16 kg cefre-sűrítmény 4kg keményítő 6 kg szójaolaj 6 kg kalciumkarbonát 4 kg nátriumklorid 2 kg kobaltklorid-6H2 0 8 g vízvezetéki vízzel feltöltve 370 literre. Az így elkészített tápközeg pH-értéke 6,45. A tápközeget gőzibevezetés útján 122 C° hőmérsékleten 40 percig sterilizáljuk. 26—-27 C°ra való lehűlés után a tápközeg térfogata 400 liter, pH-értéke pedig 6,55, Ezután a tápközeget beoltjuk a fentemlített 170 literes fermentorban tenyésztett kultúra 40 literjével. A közeget turbinás keverővel, percenként 220 fordulattal keverjük, óránként 15 m3 steril levegővel szellőztetjük és 26—27 C° állandó hőmérsékleten tartjuk. A közeg pH-értéke fokozatosan 8,55-ig emelkedik, miközben először 6—30 óra alatt a 7 értéket éri el, majd második lépcsőként 43—67 óra alatt a 7,30 értéket, majd 78—115 óra alatt szabályosan emelkedik 8,40-ig, végül 139. óra elteltével eléri a 8,55 értéket; ekkor a fermentációt megszüntetjük. Az antibiotikum termelése a,. 67. óra táján indul meg, és 90 óra elteltével éri el. a maximális értéket. Ekkor a tápközegben jelenleyő antibiotikum mennyisége 26 meg/ml koncentrációnak felel meg. 2
