151390. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-cephalosporin átalakítási termékeinek előállítására
D 151390 6 zel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, majd szárazra pároljuk be, amikor is 40,3 g sárgaszínű szilárd termék marad vissza. Ha ezt az anyagot biológiai értékmérésnek .vetjük alá, a C-oephalosporin dinitrofenil-származékának egy tiszta mintájával összehasonlítva, akkor a kapott terméket 88%-os tisztaságúnak találjuk. b) A C-oephalospoirin 2,4-dínitrofenil-származékának savas hidrolízise. A fenti eljárás során nyers állapotban kapjuk a C-cephalasparin 2,4-dinitrafenil-származékát, amely kism.ennyiségű színezett bázisos szennyezést tartalmaz; ezt oly módon távolítjuk el, hogy a szilárd terméket etilacetátban oldjuk és az oldatot 0,2 n sósavoldattal mossuk. Az etilacetátos oldatot ezután szárítjuk és az oldószert vákuum alatt ledesztilláljuk. 10,1 g nyers termékből ily módon 9,7 g tisztított terméket kapunk. 9,7 g C-cephaílosporin-2,4-dinitrofenil-szárm>azékot 100 mi acetonitril, 65 ml víz és 34 ml nsósavoldat elegyében oldunk. Az oldatot azután szobahőmérsékleten, sötétben, nitrogén-légkörben 64 óra hosszat állni hagyjuk. Utána 200 ml vizet adunk az oldathoz és az egész elegyet 5X10Ö ml etilacetáttal extraháljuk. A visszamaradó 270 ml vizes 7-ammo-cephalosporánsavoldat pH-értékét ezután telített nátriumhidrogénkarbonátoldat hozzáadásával 7,2-re állítjuk be és az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük le. c) A 7-amino-cephalosporá:nsav (7-ACA) elkülönítése. A fentiekben leírt hidrolízis és etilacetátos extrakció után visszíamaradó savas oldat főként 7-amino-oep'halosporánsavat és 7-amino-cephalosporánsav-láktont tartalmaz. Ennek az oldatnak a pH-értékét 6,7-re állítjuk be, majd klorid-ciklusban levő Dowex 1 ionoserélőgyantát tartalmazó oszlopra töltjük fel. A 7-ACA-lakton keresztülhalad az oszlopon és a szüredékben jelenik meg. Az oszlopról, vízzel történő mosás után a 7-ACA 0,05 n sósavoldattal eluálható. A 7-AOA-tartalnaú frakcióból kristályos csapadékot nyerhetünk ki, amely valószínűleg a 7-ACA ikerionos alakja, míg a 7-ACA főtömege hidroklorid alakjában oldatban marad. Ezeket az oldatokat azután fenilaoetilezésnek vethetjük alá, benzil-cephalosporin előállítása céljából. d) Az oldott 7-amino-cephalosporánsav átalakítása benzil-ceiphalosporinná. A fentiek szerint, a b) alatt leírt módon kapott lehűtött vizes oldathoz 300 ml acetont adunk, amely 3 ml fenllacetilkloridot tartalmaz. Az eközben lecsökkent pH-értéket ismét 7-re állítjuk be. Az elegyét 1 óra hosszat állni hagyjuk, miközben a hőmérsékletet szobahőfokig ihagyjúk emelkedni, majd az acetont vákuum alatti desztilláció útján eltávolítjuk. Az így kapott vizes maradék térfogata 325 ml, pH-értéke pedig 5,9. Ezt az oldatot 2X150 ml benzollal extraháljuk, a le nem desztillált aceton részleges eltávolítása céljából, majd a pH-értéket szirupszerű foszforsav hozzáadásával 3,3-ra állítjuk be és további két extrákciót végzünk 150—1'50 ml benzollal. Ezen a pH-iértéken .a fenilecetsav feleslege extrahálódik, a benzil-cephalosporin azonban mein. Az extrakció teljessé tétele céljából az oldat pH-értékét, amely a művelet folyamán 3,8-ig emelkedett, 3,3-ra állítjuk vissza, majd az extrákciót tovább folytatjuk 3X150 ml benzollal. Ezután a pH-értéket foszforsavval 2,'5-ire csökkentjük és az oldatot 3X150 ml etilacetáttál extraháljuk. Az egyesített kivonatokat 2X30 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és vákuum alatt 2—3 ml térfogatra pároljuk be. Azután 10—15 térfogát 60—80 C° forrpontú petrolétert adunk hozzá, aminek hatására egy sárgás színű szilárd termék válik le 97 mg mennyiségben. Ezt a termiéket centrifugálással elkülönítjük, 40—60 C° forrpontú petroléterrel néhányszor mossuk, majd vákuum-exszikkátorban megszárítjuk. A száraz terméket újra oldjuk 2 ml etilacetátban és 10—15 térfogat étert adunk hozzá. Ennek hatására kisimennyiségű szilárd anyag válik le, ezt kiselejtezzük. Az éter és etilacetát élegyéből álló oldószer elpárologtatása útján 72 mg szilárd terméket kapunk. Ehhez 20 ml vizet keverünk, amelyben a szilárd termiek csak kevéssé oldódik; az elegyet 0,1 n nátriumhidroxidoldattal 6 pH-értékre titráljuk, a titrálás folyamán állandó élénk keverést kell fenntartani. Az eközben levált kismennyiségű oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk, a vizes oldatot fagyasztva, szárítjuk, amikor is egy eléggé ragadós szilárd termék marad vissza. Ezt. aceton és víz 9 :1 arányú elegyének lehető legkise'bb mennyiségében (kb. 1 ml) oldjuk, majd vízmentes aceton hozzáadása útján isimét kicsapjuk. Finom színtelen tűkristályokiból' álló pelyhes csapadékot kapunk, 31,2 mg mennyiségben. A termieket oly módon tisztítjuk tovább, hogy vizes acetonban ismét oldjuk és vízmentes aceton hozzáadásával újból kicsapjuk. A benzil-oephalosporin kristályos nátriumsójának fizikai tulajdonságai. A nátriumsó hevítés hatására megsötétedik, majd 160 C°-tól kezdődően bomlik; [«]D = = +122° !(é = 1,2 vízben). Ibolyántúli színkép: Knax = 259 millimikron, Ej^ 190. Kin = 234 millimikron, E x ° m = 138,5. Infravörös színkép: Nujolban, főbb csúcsértékek ((cm"1 ): 699, 726, 1245, 1538, 1'634, 1677, 1745, 1761, 3344. Papírkromatográfia. Oldószer-rendszer butanol-etanol-víz 4:1:5 arányú rendszere. Az oldószer-rendszerrel kapott felső fázist 6 pH-értékre tompított 1. sz. Whatman-papíron krornatografáltuk: RF 0,65 — 0,67 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
