151197. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirimicin tisztítására
151197 ben oldunk. Az oldatot az előző példához hasonló módon előkészített adszorbens-oszlopon vezetjük át, majd az oszlopról lefolyó színtelen vizes oldatot 50 C° hőmérsékleten, 5—^5 liter bután óllal háromszor extraháljuk. A vizes fázis ezután már csak 130 ftg/ml biológiai aktivitást mutat. Az egyesített butanolos kivonatot vákuumban 2,5 liter térfogatra bepároljuk, a kivált primicint leszűrjük, az előző példában leírt módon acetonnal kezeljük és szárítjuk. 36,0 g teljesen színtelen tiszta primicint kapunk, amelynek biológiai értékméréssel meghatározott aktivitása 102%. A fentiekben említett biológiai értékmérés során összehasonlításul olyan standard terméket (100% aktivitás) alkalmazhatunk, amelyet Whatman-féle cellulóz-oszlopon n-butanolból megoszlásos kromatográfiával tisztítottunk. Az eluciogramot (v. ö. Michrocim. Acta, 4, 682, 1962) egységesnek találtuk. A tisztított termékek olvadáspontja 190^—194 C°, [«]5 243 fC = 0,6, butanol, etanol és víz 1:1:2 arányú elegyében). A termék savas hidrolízátuma 0,5 n BEV-kénsavban lma x — 205, 235 és 280 m./* értéket mutatott. 3. példa: 10O0 g nyers (30—40ö /o-os aktivitású) primicin 80%-os metanolos oldatát ammóniával 8 pH-értékre lúgosítjuk, majd 1000 g kristályos ólomacetátot adunk az oldathoz. Az 50 C°-ra felmelegített elegyet lehűlni és ülepedni hagyjuk, majd leszűrjük. A feleslegben maradt Pb++ -ionok eltávolítása céljából a metanolos oldatot 4 n kénsavval 6—6,2 pH-értékig savanyítjuk és a képződött PbSOi-csapadékot centrifugálással elkülönítjük. A kapott oldat, amely a lipofil pigmens-szennyezésektől gyengén sárgás, glicerines Na2 S-oldattal pozitív ólomreakciót ad, tehát kolloid PbS04 szennyezést is tartalmaz. Ehhez az oldathoz 150 g aktívszén és 150 g cellulózpor keverékét adjuk és 50 C° hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük, majd 20 C°-ra lehűtjük és aktívszenezett szűrőfelületen leszűrjük. Kristálytiszta, színtelen oldatot kapunk, amelyből a primicint az előző példákban leírt módon nyerhetjük ki. 4. példa: A primieintartalmú fermentációs termék n-butanollal készített 10 liter kivonatát (amely nagy mennyiségű pigmens-szennyezést tartalmaz, biológiai aktivitása 500—1000 mcg/ml) 1—1 liter 1%-os vizes ammóniumoxidoldattal négyszer mosunk, az alsó vizes fázist minden 5 egyes mosás után elkülönítve. Az első mosás után kapott vizes fázis barnásvörös színű, biológiai aktivitása 2 mcg/ml, a második mosás utáni vizes fázis vörös, biológiai aktivitása 1,6 mcg/ml, a harmadk sárga színű, biológiai 10 aktivitása 1,5 mcg/ml, a negyedik pedig már alig színezett, biológiai aktivitása 1,4 mcg/ml. A hidrofil pigmensektől a fenti módon mentesített nyers primicin-oldatot azután a fentebbi példákban leírt módon dolgozzuk fel 15 tovább. Szabadalmi igénypontok: 1. A 146 332 lajstromszámú törzsszabadalom 20 1. és 8. igénypontja szerinti eljárás továbbfejlesztése a primicin pigmens-szennyezéseinek eltávolítására, azzal jellemezve, hogy a fermentációs termék extrakciója útján kinyert, lipoidoktól és fehérjéktől a törzsszabadalomban 25 leírt módon mentesített primicint alkoholos, célszerűen víztartalmú alkoholos oldatban, 50— 80 C° hőmérsékleten valamely lazítóanyaggal kevert aktívszénnel kezeljük és a kezelt oldatból a primicint — adott esetben vízzel nem 30 keveredő szerves oldószerbe, pl. butanolba való átvitel útján — kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy víztartalmú alkoholos oldatként a primicin metanolos, vizes 35 metanolos, vízzel telített butanolos vagy butanollal telített vizes oldatát alkalmazzuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy lázítóanyagként cellulózt, papírport vagy vízben 40 nem oldódó por alakú szervetlen anyagot alkalmazunk. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a primicin 50—©0 C°-on vizes alkoholos ol-45 datát lazítószerrel kevert aktívszénnel töltött oszlopon vezetjük keresztül. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy hidrofil pigmensek jelenléte esetén ez utóbbia-50 kat a primicin vízzel nem elegyedő szerves oldószerbe, pl. butanolba való átoldása vagy szerves fázisban vízzel vagy vizes ammóniával történő extrakciója útján eltávolítjuk és az így előtisztított primicinoldatot kezeljük lazító-55 anyaggal kevert aktívszénnel. A kiadásért felel: a közgazdasági és Jogi könyvkiadó igazgatója. 642752 Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23. 3
