151046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású ciklopenteno-polihidro-fenantrén származékok előállítására
151046 9 A továbbiakban 16 000 liter olyan táptalajt, melynek összetétele g/l-ben a következő: 10 szaccharóz kukoricalekvár 50% primer káliumfoszfát MgS04 -7H 2 0 60,0 20,0 10,0 0,5 és amelynek pH-értékét sterilezés előtt 6,8-ra állítottuk be, a fő fermentorban másfél órán át 120°-on sterilezünk, és hűtés után a fent említett inokulummal beoltjuk. Keverés közben megfelelő sebességgel levegővel keverjük (0,5 1 levegő folyadék literenként percenként); a micéliumok kialakulnak és a fermentálást 26°-on 100 órán át folytatjuk. A kultúra szüredék minta aktivitását a fermentálás alatt agar-cső módszerrel határozzuk meg teszt mikroorganizmusként Staphylococcus aureua-t használva. Az eljárás végén a kapott aktivitás 80 gamma fuzidsav táptalaj ml-enként. A micélium kiszűrése után a tisztított fermentációs lé pH-értékét 6,0-ra állítjuk be és Podbielniak extraktorban metil-izo-butil-ketonnal kivonjuk. Ezt a kivonatot, mely 1,1 kg fuzidsavat tartalmaz, folyamatosan 11,5 pH-értékű vizes nátriumhidroxiddal extraháljuk. A kivonás után közvetlenül a vizes fázis pH-értékét 9,3-ra állítjuk be, és vákuum-bepárolóban 150 1 térfogatra töményítjük be, mely 0,9 kg fuzidsavat tartalmaz. Ezután benzolt adunk hozzá és a vizes fázis pH-értékét sósavval keverés közben 0,5-re állítjuk be; ily módon a fuzidsav benzol-szolvátja képződik. További 4 óra keverés után a csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk, majd benzollal öblítjük és szárítjuk. A nyers terméket metilénkloridban oldjuk, szűrjük, és az elegyet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot forró metanolban oldjuk, majd 0°-ra történő hűtéskor a metanolszolvát kikristályosodik, melyet kiszűrünk, jéghideg metanollal mosunk, és szárítunk, miáltal a fuzidsav színtelen metanol-szolvátját nyerjük. A fenti szolvátot vákuumban 0,01 Hgmm nyomáson, 100°-on állandó súlyig szárítjuk, miáltal szolvensmentes terméket kapunk, melynek olvadáspontja 191°—192°, infravörös maximumai: 1265, 1385, 1695, 1730 és 3450 cm"! (KBr). 2. példa: A fuzidsav nátriumsójának előállítása Keverővel ellátott 1,5 m3 -es rozsdamentes acél fermentáló tartályban 1,00 m3 alábbi összetételű táptalajt készítünk: glukóz 20,0 kg hús- és csontliszt 20,0 kg kukoricalekvár (50% száraz anyag) 2,5 kg disznózsír 20,0 kg 55 nátriumklorid magnéziumszulfát csapvíz ad 4,0 kg 0,05 kg 1000 1 5 A táptalaj pH-értéke 6,1, melyet hővel történő sterilezés után hozzáadott hígított nátriumhidroxid-oldattal 6,5-re állítunk be. Hűtés után rázótölcsérben 27°-on 48 órán át kitenyésztett Cephalosporium lamellaecola F. E. Smith— 10 F. E. Smith kultúra 3 literével beoltjuk. A tartály tartalmát keverjük, és 96 órán át 27°on óránként 0,6 m3 levegővel kezeljük. Ez alatt az idő alatt a pH-értéket 7,0-n tartjuk. A fermentálás említett időszakának letelte után az 15 antibiotikus aktivitást a szokásos agar-cső módszerrel Staphylococcus aureus törzzsel meghatározzuk, és úgy találjuk, hogy az 150 mg fuzidsav/1 tartalomnak felel meg, az azonos módszerrel mért tiszta anyag aktivitásá-20 val összehasonlítva. A táptalajból a micéliumot szűréssel elkülönítjük, a szüredék 700 1. A szüredék pH-értékét 25%-os kénsav-oldattal 6,0-ra állítjuk be, és Podbielniak extrak-25 torban ellenáramban 230 1 butilacetáttal kivonjuk. Az így nyert butilacetátos fázist egy részletben 77 1 vízzel kivonjuk, melyhez addig adunk 10%-os nátriumhidroxidot, míg a vizes fázis pH-értéke 11,0 lesz, majd a vizes fázist 30 elkülönítjük a butilacetátos fázistól. A vizes fázis pH-értékét 25%-os kénsav-oldat hozzáadásával 9,3-ra állítjuk be, majd az oldatot vákuumbepárlóban 5 1 térfogatra bepároljuk. 0,5 1 benzolt adunk hozzá, és a vizes fázis 35 pH-értékét —• keverés közben — sósav hozzáadásával 3,0-ra állítjuk be, miáltal a fuzidsav benzol-szolvátjából álló csapadék képződik. 5 órai keverés után szűrjük, vízzel és benzollal mossuk, szárítjuk. Benzolból történő át-40 kristályosítás után 72 g 187°—189° op.-ú anyagot kapunk. Az így nyert benzol-szolvátból 20 g-t 800 ml vízzel szuszpendálunk, és ehhez a szuszpenzióhoz addig adunk 0,5 n nátriumhidroxid-olda-45 tot, míg a pK-érték 9,0 lesz. Majd az elegyet szűrjük, és a szüredékhez 2000 ml n-butanolt adunk, majd az elegy víztartalmát azeotropos desztillációval vákuumban eltávolítjuk. A maradékból a kívánt nátriumsó éter hozzáadá-50 sara kiválik. A csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, és szárítjuk. Etanol és aceton elegyéből történő átkristályosítás után 14,4 g tiszta kristályos nátriumsót nyerünk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás antibiotikus hatású fuzidsav vagy annak sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a Cephalosporium nemzetséghez tartozó 60 gombafajt aerob körülmények között szénforrást, nitrogénforrást és a gomba táplálkozásához szükséges szervetlen sót és mikrotápanyagokat tartalmazó vizes táptalajon tenyészt- . jük, majd az így nyert fuzidsavat elkülönít-65 jük, töményítjük és tiszta formában kinyerjük 5
