151042. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a B12-csoportba tartozó vitaminok előállítására
151042 rátok már előrehaladott leépülése után a tenyészoldatban levő baktériumsejt friss súly 5%-ot meghalad. Optimális mennyiségű oltóanyag alkalmazásakor ez 70—75 óra múltán következik be. Optimális oltóanyag mennyiségnek olyan baktériumtenyészet bizonyult, amely a főtenyészet tenyészoldat térfogatának 10%-a. Ezt a tenyészoldatot olyan közegben tenyésztjük, amely sem kobalt-, sem pedig cianid-ionokat nem tartalmaz. A rendelkezésre álló asszimilálható szánhidrogén tápanyag és nitrogén az oltó tenyészetben csak a főtenyészet 50%-a lehet. A fermentor ürítését célszerűen úgy végezzük, hogy a baktériumsejteket a tenyészoldattól elkülönítjük és azután sejtfalroncsoló szerekkel a B12 -vitamint a baktériumsejtekből szabaddá tesszük. Az elválasztott baktériumsejtek optimális fermentor ürítésekor 4—6% baktériumsejt friss súly és 15—25 mg/liter tenyészoldat mellett körülbelül 1 kg baktériumsejt friss súlyban 400—500 mg B12 -vitamin-aktív anyagot tartalmaznak. Ha a baktériumsejtek szárazsúlya a baktériumsejt friss súlyának 40%-a, akkor ez 1 kg baktérium-szárazanyagra körülbelül 1—1,2 g B12 -vitamin aktív anyagot jelent. 1. példa: Egy fermentorba 400 liter alábbi összetételű tápoldatot adagolunk: Nyers dextróz-lé 100 g/l Író 50 g/l Streptomices micélium 30 g/l NH4 / 2 C0 3 10 g/l Szójaolaj 1 g/l Co(NO.,)2 5 mg/l pH 7,3 A tápoldatot 40 liter 3—5 napos Propioni baktérium tenyészettel beoltjuk. A pH-t kálilúggal vagy ammóniával 7,3-ra állítjuk be. A hőmérsékletet 30 C°-on tartjuk. 26 és 33 C° közötti hőfokingadozások a fermentálást nem befolyásolják. Amint a Hf -koncentráció egy pH egységgel növekedett és a baktériumsejt friss súly a tenyészoldatban 1%-ot meghaladja, a fermentor további kezelésekor 2 órás időközökben 10 percig steril levegőt és olyan mennyiségű cianidot adagolunk, hogy a tenyészoldat cianidkoncentrációja fermentálás kezdetekor (20—48 óra) 0,1—1 mg% NaCN, a fermentálás vége felé pedig (48—75 óra) 1,0— 5 5,0 mg% legyen. 75 órás fermentálás után a fermentort ürítjük. 2. példa: 10 Egy fermentorba 15 000 liter alábbi összetételű tenyészoldatot viszünk: Nyers dextróz-lé Streptomices micélium 15 Író Kukoricalekvár CaC03 KH2 P0 4 Szójaolaj 20 Co(N03 ) 2 pH A fermentort 15001 liter cianid- és kobaltionmentes tenyészközegben tenyésztett baktérium-25 tenyészettel beoltjuk, a 20 órás fermentálási idő után 2 órás időközökben 5,6-dimetil-benzimidazolt, á -aminolevulinátot, p-aminobenzoesavat és káliumcianidot adagolunk előzetes 20 percig tartó steril levegőztetés után; ilyen mó-30 don a tenyészoldat p-aminobenzoesav tartalmát 0.2—0,3 mg%-ra, 5,6-dimetilbenzimidazol tartalmát 0,1—2 mg%-ra, az 8_am i no levulinát tartalmát 10:—50 mg%-ra és a káliumcianid tartalmát 0,1—5 mg%-ra, a hidrogénionkon-35 centrációt pedig ammóniával 7,2-re állítjuk be. 80 órás fermentálás után a fermentort ürítjük. 40 45 50 90 g/l 10 g/l 30 g/l 50 g/l 3 gll 5 g/l 1 g/l 5 mgA 7,2 Szabadalmi igénypont: Eljárás a B12 -csoportba tartozó vitaminok előállítására Propioni baktériumokkal, amelyre jellemző, hogy a fermentáláshoz nagy szénhidrát- és nitrogéntartalmú nyersanyagokat, előnyösen nyers dextróz-levet és streptomicesmicéliumot alkalmazunk és a fermentáló baktériumokat szakaszos levegőztetés mellett cianidionok adagolásával anaerob növekedésre kényszerítjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 642567 Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23.
