151003. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív, vízoldható sejtfalpoliszaharidok előállítására mikroorganizmusokból

151033 8 padékot eentrifugálással eltávolítjuk. A felülúszó tiszta oldathoz (856 ml) 26 ml 10%-os .kalciumklorid oldatot adunk (0,3% telítésig). A kiváló csapadékot lecentrifugáljuk. A felülúszóhoz annyi 40%-os nátriumhidroxidot adunk, hogy a közeg pH-ja 9,5 legyen. A néhány percnyi állás után kiváló csapadékot centrifugáljuk és a 912 ml felülúszóhoz felényi térfogat, azaz 456 ml etilalkoholt adunk, majd centrifugáljuk. A centrifugálás üledékét desztillált vízben sósav cseppenkénti hozzáadása közben oldjuk, a közeg pH-ja 5 körül van. A nem oldódó részt eentrifugálással eltávolítjuk. A felülúszó 120 ml-ét 180 ml etilalkohollal hozzuk össze. A kivát csapadékot lecentrifugáijuk, majd acetonnal szárítjuk. C) 200 g mosott Streptomyces nursei micéliumot 1000 ml, 20 g nátriumkloridot is tartalmazó, 0,1 n nátronlúg oldatban vesszük fel és 40 C°-on 1 órán át kevertetjük. Ezt követően a pH-t sósav hozzáadásával 6-ra állítjuk, szobahőmérsékletre hűtjük és centrifugáljuk. A zavaros felülúszó (1050 ml) 32 ml 10%-os kalciumklorid oldatot adagolunk és a kiváló csapadékot eentrifugálással eltávolítjuk. A felülúszó pH-ját nátronlúg oldattal 9,7-re állítjuk, a csapadékot lecentrifugáljuk és az így nyert tükrös oldathoz (1020 ml) 0,5 tf. (510 ml) etilalkoholt adunk. A eentrifugálással gyűjtött üledéket desztillált vízben oldjuk, miközben a pH-t sósavval 5-re állítjuk. A nem oldódó részt kicentrifugáljuk és az oldatból az anyagot (170 ml) 1,5 tf. (255 ml) etilalkohollal kicsapjuk. Az elkülönített terméket acetonnal szárítjuk. Eredmény: A. B. Termék súlya i 367 mg 256 mg 234 mg Szénhidráttartalom: 44% 31» /\) 36% Clearing' aktivitás: A !930 1540 590 (E./testsúly kg) 2. példa: 200 g mosott Streptomyces nursai micéliumot 1000 ml, 20 g nátriumkloridot is tartalmazó, 0,1 n nátronlúg oldattal 40 C°-on 1 órán át kevertetünk. A közeg pH-jának sósavval 6-ra való állítása után az elegyet felforraljuk, majd szobahőmérsékletre lehűtve centrifugáljuk. A felülúszóhoz annyi 10%-os kalciumklorid oldatot adunk, hogy a kalciumklorid végkoncentrációja 0,3% legyen. A kicsapódó anyagot eltávolítjuk, és a nyert oldat pH-ját nátronlúggal 9,7-re állítjuk. Ügy centrifugálás után a felülúszót 0,5 tf. etilalkohollal hozzuk össze és a kicsapódó anyagot gyűjtjük. A csapadékot 100 ml desztillált vízben oldjuk, miközben a pH-t sósav folyamatos adagolásával 5—6-ra állítjuk. A fel nem oldódott anyagot eentrifugálással eltávolítjuk. A 100 ml oldathoz ez-5 után 50 ml etilalkoholt adunk és a kicsapódó anyagot külön választjuk (A.). A felülúszó folyadékhoz újabb 100 ml etilalkoholt adunk és a keletkező csapadékot ugyancsak elkülönítjük (B.). Mind az A. mind a B. csapadékot 100—100 10 ml desztillált vízben feloldjuk, 80 C°-ra felmelegítjük, annyi n-butanolt adunk hozzájuk, amennyi ezen a hőmérsékleten még homogén fázisban marad (10—13 ml), és 10 percig kevertetjük. Szobahőmérsékletre lehűtve a vizes 15 fázist elkülönítjük, belőle az aktív anyagot 1,5 tf. etilalkohollal kicsapjuk és a terméket acetonnal szárítjuk. 20 25 50 55 60 Eredmény: A. B. Termék súlya: 160 mg 150 mg Szénhidráttartalom: 28% 82% Clearing aktivitás: 1130 2110 (E/testsúly kg) 30 3, példa: 540 g csapvízzel mosott Saccharomyces cerevisiae-t 5000 ml 0,1 n olyan nátronlúg oldattal szuszpendálunk, amely 2% nátriumkloridot is 35 tartalmaz. Késes homogenizátorral történt felkeverés után 1 órán át 40 C'-on kevertetjük, majd sósavval a pH-t 6-ra állítjuk és felforraljuk. Szobahőmérsékletre történt hűtés után centrifugálunk. A felülúszót 0,3%-os kalcium-40 klorid tartalomig 10%-os kalciumklorid oldattal telítjük, majd pH-ját 9,7-re állítjuk be 40%-os nátronlúg oldattal, miközben sok csapadék válik le; ezt eentrifugálással különítjük el. A felülúszóhoz (4440 ml) 0,5 tf-nyi etilalko-45 holt adunk és az ekkor kivált csapadékot centrifugálás után desztillált vízben, sósav óvatos adagolása mellett 5-ös pH-n feloldjuk. Az így nyert oldathoz (830 ml) 0,5 tf. (415 ml) etilalkoholt adunk, a szobahőmérsékleten kivált csapadékot eentrifugálással eltávolítjuk, a felülúszóhoz pedig 1 tf. (830 ml) etilalkoholt adunk. A levált csapadékokt centrifugálás után feloldjuk 210 ml desztillált vízben és az oldatot két részre osztjuk: A) 105 ml oldatot 80 C°-ra felmelegítünk, telítjük n-butanollal és 10 percig rázogatjuk 80 C°-on. Szobahőmérsékletre való hűtés és centrifugálás után a vizes fázist 1,5 tf. etilalkohollal kicsapjuk, a csapadékot acetonnal mossuk, mjd exikátorban kiszárítjuk. B) 105 ml oldathoz 105 ml kloroform:butanol (5:1) elegyet adunk és szobahőmérsékletig 10 percig rázótölcsérben kirázzuk. A tejszerű emulziót centrifugatással választjuk el és a vizes 65 fázishoz 1,5 tf. etilalkoholt adunk. Az így nyert 4