150555. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a B12-vitamin elválasztására az egyéb kobalaminszármazékoktól
2 150.555 folyó oldatból a Bi2-vitamin a III-faktortól, ha a vákuumban betöményített vizes oldatot oly szerves oldószereleggyel extraháljuk, amely 1 tf. rész fenolra számítva 7—8 tf.rész kloroformot és a fenol tf.-ra számítva 0,2—0,3 súlyrész timolt .tartalmaz: a legjobb eredményt 1 :7,6 : 0,24 arányú fenol-kloroform-timol oldószerelegy alkalmazásával érhetjük el, amely gyakorlatilag teljes szelektivitással oldja át a szerves fázisba a B12- vitamint, míg a III-faktor a vizes oldatban marad. Az inkomplett kobalamin-származékoknak a Bi2-vitamin és a III-faktor mellől történő elválasztására a találmány értelmében alkalmazott oxicellulózt erre a célra eddig nem alkalmazták; a találmány alapját éppen az a felismerés képezi, hogy ez az erősen poláros felületű, nagy mennyiségű COOH-csoportot tartalmazó adszorbens gyakorlatilag teljes szelektivitással köti meg a nyers koncentrált vizes, vagy vizes-alkoholos oldatból a B]2-vitamin mellől eltávolítandó, biológiailag értéktelen faktorokat. A találmány szerinti eljáráshoz célszerűen olyan mértékben oxidált oxicellulózt alkalmazunk, amelynek COOH-tartalma 10—15%. Az abszorpciós művelet után az oxicellulóz 60—70 C° hőmérsékletű, 0,1 n sósavoldattal regenerálható. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitelezési módját közelebbről az alábbi példa szemlélteti. Példa: 2 liter tisztított és töményített oldatot, mely tartalmaz 2,5 g Big-viamint és 12,5 g inkomplett származékot, két részletben 1,6 kg oxicellulózt (melynek COOH-tartalma 10—15%) tartalmazó oszlopra (170X800 mm) öntjük fel. Az átfolyt Bio-vitamin és III-faktor tartalmú vizes részt vákuumban kb. 3 literre koncentráljuk be. Ezt az oldatot 4X1.5 liter 1 : 7.6 : 0.24 fenol-kloroform-timol oldószereleggyel extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük és 2X1.5 liter vízzel mossuk. A szerves fázisból a Bi2-vitamint aceton hozzáadásával kevés (kb. 200 rpl) vízbe szorítjuk át. ezt kevés kloroformmal egyszer mossuk. Kristályosítás után 1,95 g USP XV minőségű kristályt kapunk. A III-faktor tartalmú vizes oldatot egy oldószeres tisztítási lépés után ugyancsak kristályosítani lehet. Az oxicellulóz oszlopot 60—70 C° hőmérsékletű 0,1 n sósavoldattal regeneráljuk, majd ionmentes vízzel semlegesre mossuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Bi2-vitamin elválasztására a fermentációs előállítás során keletkező egyéb kobalaminszármazékoktól (ún. faktoroktól), azzal jellemezve, hogy a nyers fermentációs lé ismert módon történő feldolgozása során kapott tisztított és betöményített vizes vagy vizes-alkoholos oldatból, amely a B|2-vitamin mellett főként III-faktort és inkomplett kobalamin-származékokat tartalmaz, oxicellulózon történő adszorpció útján különítjük el a Bi2-vitamin és a III-faktor mellől az in komplett kobalamin-származékokat. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az elválasztandó Bj2- vitamin és rokonszármazékok vizes oldatát 10— 15% COOH-tartalmú, H-alakban levő oxicellulózt tartalmazó oszlopon folyatjuk keresztül. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az oxicellulózról lefolyó, inkomplett faktoroktól gyakorlatilag mentes oldatból a Bi2-vitamint oly szerves oldószereleggyel való extrakció útján nyerjük ki szelektíven a III-faktor mellől, amely 1 tf. fenolra számítva 7—8 tf. kloroformot és a fenol-térfogatra számítva 0,2—0,3 súlyrész timolt, célszerűen 1 rész fenolra 7,6 tf. rész kloroformot és 0,24 sr. timolt tartalmaz. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 632164. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
