150512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B 2 és B 12 vitamintartalmú koncentrátum előállítására eremothecium ashbyi és rhizobium meliloti törzsek társított tenyészetével
150.512 Egyszerűség kedvéért csak a csúcsértékeket tüntetjük fel az 1. sz. táblázatban. A meghatározás B2 vitamin esetében fotometriásan, Bi2 esetében pedig Coli-titerrel történt. 1. sz. táblázat. B2 és B12 vitamin értékek az eredeti és a módosított táptalajokban. * = Eremothecium ashbyi ** = Rhizobium meliloti i Táptalaj Törzs b2 B12 jele csúcsérték pg/ml LXIII LXIV LXIII LXIV Er* Er.* Rh.** Rh.** 430 495 1,8 6,5 LXXII LXXII Er. Rh. 265 5,10 A kapott eredmények alapján a kitenyésztett variánsok a célszerűbb, módosított táptalajban legalább annyira aktívaknak bizonyultak, mint az eredeti táptalajban. 2. példa: Rázott tenyészetekben vizsgáltuk a Rhizóbium ráoltása időpontjának hatását a B2 vitamin és a B12 vitamin egyidejű termelődésének alakulására. A fermentlé vitamintartalmát 12 óránként határoztuk meg. Egyszerűség kedvéért itt is csak a csúcsértékeket közöljük a 2. sz. táblázatban. 2. sz. táblázat. Különböző időpontban ráoltott Rhizóbium tenyészetek hatása a vitaminok termelődésére. Táptalaj Rh. ráoltás ideje B2 B12 csúcsérték yg/ml LXIV 48 óra 572 3,20 LXIV 65 óra 625 3,40 LXIV 74 óra 440 2,82 Legkedvezőbbnek találtuk, ha a 48—65 órás Eremothecium tenyészeteket társítottuk a Rhizóbium tenyészettel. Az ebben az időben eszközölt Rhizóbium meliloti „fertőzés ” ugyanis sem időben, sem értékben nem befolyásolta a B2 fermentációt, ugyanakkor jelentékeny mennyiségű B12 vitamin is képződött. 3. példa: Megvizsgáltuk a 48 órás Eremothecium ashbyi tenyészetre ráoltott Rhizóbium inokulum menynyiségének hatását a B2 és Bi2 vitaminok termelődésére. A legjobb eredményt a fermentátum 5%-ának megfelelő mennyiségű Rhizóbium tenyészet ráoltásakor kaptuk. (Lásd 3. sz. táblázat.) 3. sz. táblázat. Az inokulum mennyiségének hatása a vitamintermelés alakulására. Táptalaj jele Ráoltott Rh. % b2 B12 csúcsérték pg/ml LXIV LXIV 5 10 • 735 415 2,20 2,70 4. példa: A rázott kísérletekben szerzett tapasztalatok alapján 5 literes fermentorban is megkíséreltük a társított vitamintermelést. A LXIV-es jelű táptalajt 2% Eremothecium ashbyi inokulummal oltottuk. A fermentoron a táptalaj 1 literére számítva 0,5 liter levegőt fúvattunk át percenként. A fermentálást 27—29 C° közötti hőmérsékleten végeztük. A 44. órában a fermentátum 5%-ának megfelelő mennyiségű Rhizóbium meliloti ino kulummal oltottuk az Eremothecium ashbyi tenyészetet. A fermentálást a fenti viszonyok között tovább folytattuk a 87. óráig. A Bi2 csúcsértéket pedig a 78. órában értük el. . A csúcsérték B2 esetén 735 gamma, a B12 esetében pedig 2,20 gamma volt milliliterenként. Eredményeinket a 4. sz. táblázatban foglaltuk össze. 4. sz. táblázat. A B2 és a Bi2 vitaminok bjószintézisének alakulása társított fermentálás folyamán. Vitaminok Aktivitás a fermentáció 48. 66. 75. 1 78. 1 87. órájában; gg/ml b2 460 735 635 — 635 Bj2 — — 1,60 2,20 1,87 Amint látható, fermentorban is eredményesen együtt lehetett tenyészteni a két mikroorganizmust. A kapott eredmények megfelelnek a rázott tenyészet alapján várható értékeknek. 5. példa: A 4. sz. példában közölt kísérletet 5000 literes fermentorban is megismételtük. A vitamin meghatározására vonatkozó eredményeinket az 5. sz. táblázatban foglaltuk össze. 5. sz. táblázat. A B2 és Bf2 vitaminok bioszintézise társított fermentáció folyamán. Vitaminok Aktivitás a fermentáció 28. 1 45. 52. 1 58. 1 64. 1 69. 75. órájában; yg/ml b2 245 650 . 960 1020 1200 1020 925 b12 0 0 0 0 1,80 2,20 3,20
