150177. lajstromszámú szabadalom • Eljárás coli-inaktív kobalamin-keverékek átalakítására coli-aktív származékokká

150.177 3 mert jelzőanyagokkal kongruens elmozdulást észlelünk az átalakított anyagnál. A kromatogramról az elvált csíkokat kivágjuk, részint kolorimetrikusan, részint mikroibiológíiailag kiértékeljük. A kiindulási 2,2 g változatlanul megmaradó színezék E. coli aktivitása ezúttal 6,460 g-ra emelkedett. Az E. coli-aktív anyagok növekedése: 5,757 g. 2. példa: Az 1. példában ismertetett módon nyert faktorkeverékei; szárítás után finom porrá őröljük. Ebbői 500 g-ot, mely kolorimetrikus méréssel 110 g színezéket (kobalamin keverék) tartalmaz, 5 liter vízmentes dime'tilformamidban enyhe melegítés közben (60—80 C°), 10 literes jénai üvegkörtében, állandó keverés mellett feloldunk. Az 500 g'-nyi kiindulási anyag E. coli aktivitása 32,5 g. A beoldódást 2 óra múlva befejezettnek tekinthetjük, annak ellenére, hogy oldatlan anyagok maradnak vissza. A keveréket jeges vízzel lehűtjük, majd a hűtést szárazjég^aceton eleggyel folytatva —10 és —30 C° kö'zötti hőmérsékletre hűtjük. 350 ml, előzőleg f ómnál riummal abszolutizált, majd frissen ledesztillált trietilamint öntünk az oldathoz. Kis idő múlva 250 ml, frissen desztillált klórszénsiavetiléiszter és 250 ml dimetilformamid elegyét csurgatjuk vékony sugárban a keverékhez. Félórai várakozás után 134 ml l-amino-2-propanol és 134 ml dimetilfomxarnid elegyének lassú beadagolása közben a hűtést megszüntetjük. Ujabb fél óra múlva, a keverés •meghagyásával száraz NIí3 gázt vezetünk a reakcióelegybe. A gáz bevezetését úgy szabályozzuk, hogy 10—12 percen belül a rendszer telítődjék NH3 gázzal. Ismételt félórai várakozás után 12,5 liter benzolba csurgatjuk az ammóniával telített oldatot, majd rövid keverés után a kivált csapadékos oldatot kőagyag szűrőbe öntjük. Három ízben 4—4 liter ahsz. acetonnal a szűrőnucesoin, levő anyagot átmossuk, majd gondosan oldószermentesre szívatjuk. Ezután 20 literes edénybe visszük át a fentmaradó csapadékot és 10 liter deszt, vízben feloldjuk. A kőagyag szűrőt kevés deszt. vízzel átmossuk. Az oldat pH-ját 10%-os sósavval 4-re állítjuk, majd 100 ml 10%-os NaCN oldat hozzácntése után a 6 és 6,5 közötti végleges pH-érékre állítjuk be az elegyet. Jól elszívó fülke alatt fél óráig 56 C°-o.n tartjuk. Lehűtés után szenes adszorpcióval vagy szerves oldószeres átrázással ionmentesítjük az átalakított kobalamin keveréket. Az üzemi méretben elvégzett ion és szerves oldószermentesített vizes oldat E. coli aktivitása ezúttal 342 g. Az E. coli aktív származékok növekedése: 309,5 g. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás coli-inaktív kobalamki-keverékek átalakítására coli-aktív származékokká, azzal jellemezve, hogy a Bi2-vitamin termelő, elsősorban metaanobaktériumos fermentáció feldolgozott termékének anyalúgjában maradó, főként coliinaktív komplett és inkomplett faktorokat együtt tartalmazó elegyet megszárítva, vízmenes közegben tercier aminnal, klór-szénsavetilészterrel és l-acmi.no-2-pnopanollal kezeljük, majd ezt követően száraz ammónia-gázzal telítjük az oldatot, azután pedig a képződött coli-aktív termékeket ismert im ód on kinyerjük az oldatból. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy tercier aminként trietilamint alkalmazunk vízmentes dimetilformamid jelenlétében, 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a felhasználandó reagenseket a kolorimetrikusan mért faktor-tartalomhoz viszonyítva feleslegben alkalmazzuk. 4. Az 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy l-amino-2--propanolként dl-l-amino-2-propanolt alkalmazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó Igazgatója 630438., Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.