149678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteránvázas vegyületek oldására és adagolására mikroorganizmusok tenyészeteihez
149.678 3 A táblázat jól szemlélteti, hogy az ecetsavas és a CaCl2-metanolos adagolási mód mellett az oxidáció legalább oly termeléssel történt meg, mint mikor a fermentátumot 18 órán át oldószermentesítettük levegőztetéssel. 2. példa: Absidia orehidis kéthetes burgonyás ferdeagar tenyészetéről készült spóraszuszpenzió 1—1 miével oltottunk 3-szor 100 ml steril 0j jelű táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer lombikba. Az Oj ielíí táptalaj összetétele: 1% pepton, 2o/0 malátakivonat csapvízben feloldva, 6-os pH-értékre beállítva. A lombikokat 121 C°-on 25 percig sterilizáltuk. A beoltott lombikokat 24 C°-os termosztátszobában 200-as fordulatszámú rázóasztalon inkubáltuk 24 óra hosszat, majd a három összeöntött tenyészettel oltottunk be 5 liter 1% technikai glükózt, 0,5% (NH4 ) 2 S04 puriss-t és 2% nedves kukoricalekvárt tartalmazó 5,5-es pH-értékre beállított steril táptalajt. Oltás után a táptalajt tartalmazó 10 literes fermentort 24 C°-os vízfürdőben két napon át, 300-as fordulatszámú keverés és percenként 5 liter steril levegő átbocsátása mellett inkubáltuk. Ebből a tenyészetből 2,5—2,5 litert 2,5 liter steril vizet tartalmazó 10 literes fermentorokba fejtettünk át sterilen. Ezekhez a meghígított tenyészetekhez adagoltunk Reichstein-féle S-vegyületet hidroikortizon, illetve epi—F vegyület nyerése céljából. Az 1 jelű fermentorhoz 80 ml etanolban, a 2 jelű fermentorhoz 8 ml 10% CaCl2 -2H 2 0-t tartalmazó metanolban oldva adagoltunk 800—800 mg szteroidot a 0., 4., 10. és 16. órában. A fermentátumokban az S-vegyület koncentrációjának változását a 4. táblázat foglalja össze. A számok y/ml-ben fejezik ki az S-vegyület koncentrációját, a kénsavas kromogén 530 m/x-nál mért extinkciója alapján. 4. táblázat. 0 2 4 6 8 10 12 14 óra 1. 145 44 13 98 31 15 115 63 2. 137 61 40 118 10 7 37 12 16 18 20 22 24 óra 1. 35 138 99 76 56 2. 7 52 16 12 8 A 4. táblázat jól szemlélteti, hogy etanol mint oldószer jelenlétében jóval lassúbb az oxidáció. Szabadalmi igény-pontok: 1. Eljárás, szteránvázas vegyületek oldására és adagolására mikroorganizmusok tenyészeteihez, azzal jellemezve, hogy az adagolandó, a fermentátum 1 literére számított 800 mg vagy ennél magasabb szteroidmennyiség oldására használt oldószer koncentrációját beadagolás után a fermentátumban nullára csökkentjük, vagy — primer hidroxil-csoportot tartalmazó szteroidok esetében — a szteroidok vízmentes kalciumkloriddal, magnézíumkloriddal vagy egyéb alkoholban oldható sókkal alkotott komplexeit képezve a komplex képzés miatt bekövetkezett oldhatóságnövekedés felhasználásával olyan kis mennyiségű oldószert alkalmazunk, amely az átalakítást végző enzimek biológiai aktivitását nem befolyásolja. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szteroidokat alifás monokarbonsavban, vagy szubsztituált alifás karbonsavban oldva juttatjuk a fermentációs közegbe, majd ekvivalens anorganikus vagy organikus bázissal az oldószert közömbösítjük s a képződő só mellett az átalakítást elvégezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás fogatnatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szteroidot alifás vagy aromás aminban oldva juttatjuk a fermentációs közegbe, majd ekvivalens anorganikus vagy organikus savval az oldószert közömbösítjük és a képződő só mellett az átalakítást elvégezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatos!tási módja, azzal jellemezve, hogy az alkoholban oldható, sóval képezett komplexet 1—7 szénatomszámú alkoholban hozzuk létre. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szteroidokat Corynebacterium simplex tenyészetéhez adagoljuk. 6. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szteroidokat Absidia orehidis tenyészetéhez adagoljuk. A Kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 621708. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
