149286. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az Aujeszky-féle vírus csökkentett virulenciájú, immunizáló képességű vírusvariánsának és ebből készült oltóanyag előállítására

Megjelent: 1962. április 3Q. . MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL 149.286. SZÁM 30. h. 1-8. OSZTÁLY — BA—1476. ALAPSZÁM Eljárás az Aujeszky-féle vírus csökkentett virulenciájú, immunizáló képességű vírusvariánsának és ebből készült oltóanyag előállítására Feltaláló: dr. Bartha Adorján állatorvos, Budapest A bejelentés napja: 1960. szeptember 13. Ismeretes, hogy egyes fertőző betegségek ellen a háziállatokat aktív immunitással ruházhatjuk fel, ha azokat a betegség kórokozójának gyengített virulenciájú változatát tartalmazó oltóanyaggal, vakcinával oltjuk be. Az Aujeszky-féle betegség ellen ily módon eddig nem. tudtunk védekezni, mert annak megfelelően gyengébb virulenciájú vírusváltozatokat nem sikerült előállítani; a szokásos kémiai szerekkel inaktivált virulens vírusoknak eddig nem volt antigén hatása. Az Aujeszky-féle vírus Dulfoeccoi-féle plákkmódszerrel szélesztett szövettenyészetét vizsgálva megfigyeltem, hogy a szövettenyészetben 2—3 nap múlva jelentkező, feltehetőleg egy-egy vírusrészecske elszaporodásából keletkezett vírustelepekre jellemző tarfoltok egy kis hányadának kisebb az átmérője, mintegy csak a fele; kétharmada az átmérője, mint a túlnyomóan keletkező tarfoltoké. Az ilyen kisebb tarfoltokból származó vírust a Dulbecco-féle plákkmódszerrel tenyésztve következetesen csak kis: telepek jelentkeztek. Kísérleteim során azt tapasztaltam, hogy e kis telepeket képező vírus az, Aujeszky-féle vírus csökkent virulenciájú változata, továbbá hogy ez a betegség elleni immunitás kiváltására alkalmas. E vírusvariánst ,,K" variánsnak, a virulens vírust pedig ,,N" variánsnak neveztem el. A kis' telepeket képező, csökkent virulenciájú „K" -vírusvariáns oltóanyag termelésre alkalmas, melynél a virulencia csökkenésié végleges. A kísérleti állatokra vonatkozó csökkent vírulenciáján kívül citopatogén tulajdonsága is különbözik a nagy telepeket képező ,,N" .vírusviariánstól. Nevezetesen a nagy telepekét; képező virulens ,,N" vírusvariáns citopatogén hatása a sertés- és borjúvesehám tenyészetekben többnyiire több (5—100) sejt összeolvadásából mutatkozó szineieiumképezésben jelentkezik, viszont a kis telepet képező ,,K" vírusvariáns citopatogén hatása csupán a hámsejtek izolált lekerekedésében és elfajulásában nyilvánul meg. A ,,K" vírusvariánsnál tehát nincs szineicium-képzés. A ,,K" vírusvariáns hasznos háziállatainikat nem betegíti meg szemmellátható klinikai tünetekben, de a nyulakra nézve bizonyos virulenciával még bír. Az 1 kg súlyon aluli nyulakat halálosan megbetegíti, de a 2 kg-nál súlyosabb nyulakban csak • az esetek 0—50%-ában okoz halálos végű betegséget. A vírus csökkent virulenciáját az is igazolja, hogy a hatására 'megbetegedett nyulakban a halál 2—7 nappal később következik be, mint az ugyanolyan mennyiségű virulens vírussal fertőzött nyulakban, továbbá, hogy a megbetegedett nyulaknál és macskáknál a betegségre jellegzetes vakaródzás sohasem jelentkezik. A ,,K" és ,,N" típusú variánsok felismerésére legjobban a sertés- és borjúvese hámsejttenyészetek felelnek meg, de csak abban az esetben, ha ezeken a tápfolyadék pH-ja 6,8—7,0. Ennél lúgosabb közegben ugyanis az ,,N" típusú' variáns is a ,,K" típusú variánséhoz, hasonló tulajdonságókat mutat a szövettenyészetben. A ,,K" variáns emlősvesehámsejtek egyrétegű tenyészeteiben vagy csirkeemibrióból származó vegyes sejttenyészetekben jól elszaporítható és a legmagasabb vírustiter idején aratott vírus liofilizált állapotban hónapokig, nem liofilizált állapotban +4°-on tartva pedig 10 napig eredményesen használható háziállataink immunizálására. A találmány értelmében az Aujeszky-féle vírus cisökkentett virulenciájú immunizáló képességű vírusvariánsát szövettenyészetek felhasználásával, akként állítjuk elő, hogy az Aujeszky-féle vírust emlősök sejttenyészetén,, különösen sertésvesehám sejttenyészeten Dulbecco-féle plákkmódszerrel szélesztjük, mely módszernél a fedőközeg előnyösen agar, pH-ját 6,8-—7,0 értékre állítjuk be, majd e szélesztés során kapott telepekből a kisebb telepeket kiválasztjuk és azok vírusát szövettenyészetben elszaporítva a szélesztést a Dulíbeeco-féle módszerrel újból megismételjük és e szélesztést.