149186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetraciklin előállítására
4 149.186 2. 2 ml inokulum táptalajon nyert 48 órás tenyészetből beoltunk 100 ml fermentációs táptalajt, 500 ml-es ErJerameyar lombikba és rázóasztalon 88 órát tenyésztjük 25 C°-on. A fermentációs táptalaj összetétele 2% keményítő, 1% földi mogyoróliszt, 0,3% kufcoricalekvár (szárazanyagra számolva), 0,5% NH4NO3, 0,4% CaC03, 0,2% káliumnitrát, 0,3% pálmaolaj. Sterilezes után a pH 6,1—6.3. Antibiotikum40h 64h 88h tartalom E/ml 1450 2225 2100 Tetraciklin % — 92 91 3. CDSD—314 törzs inokulum fázisban —10 C°on lefagyasztott vegetatív tenyészetéből 30 ml-el beoltunk 6 liter inokulum táptalajt. 28 órát tenyésztjük keverés és levegőztetés mellett (6 liter levegő/min.). A kifejlődött tenyészetből 600 ml-el beoltunk 1. példa szerinti 6 liter fermentációs táptalajt, melyet az inokulumhoz hasonlóan tenyésztünk 25 C°-on, 6 liter/min. levegőztetéssel. 28h 40h 46h 52h Antibiotikumtartalom E/ml 724 1289 1587 1905 Tetraciklin % — 88 90 91,5 4. 10 liter fermentációs folyadék (1310 E/ml; 90,5% tetraciklin) pH-t 10 n H2 S0 4 Hal 2,5-re állítjuk, majd leszűrjük. A szűrlethez 150 ml 10%-os vizes cetilpiridiniumbromid oldatot adunk, a pH-t 9-re állítjuk 5 n nátrium hidroxiddal és a kicsapódott kvaterne:rsót szűrjük. Vízzel átmossuk, majd 300 ml vízben felszuszpendálva a szuszpenzió pH-ját oxálsavval 1,8-ra állítjuk és szűrjük. Szűrés után a csapadékot még 150 ml 0,01 n HCl-el átmossuk és a mosófolyadékot egyesítjük az első szűrlettel. Ezután 45 g nátrium kloridot adunk az oldathoz és három részletben 150—150 ml nbutanollal extraháljuk. A butanolos kivonatokat egyesítjük, majd 0,01 n sósavban oldott 0,05%-os FeCls oldattal három részletben extraháljuk (3X150 ml. A vizes kivonatokat egyesítjük, az oldat pH-ját 2 n NH40H-<al 3,5-re állítjuk és nátrium bórhidridet adagolunk hozzá halványsárga szín eléréséig (1 g NaBH4 a pH-t 6-ra állítjuk és az oldatot vákuumban 40 C° alatti hőmérsékleten felére koncentráljuk be. 24 óra +5 C°-on való állás után a kivált kristályokat szűrjük, kevés deszt. vízzel és hideg alkohollal átmossuk, rnajd vákuumban megszárítjuk. 6,5 g tetraciklin trihidrátot kaptunk, 870 E/mg aktivitással. Kitermelés a kiindulási tetraciklin-tartalomra számolva 47.5%. Papírkromatográfiás vizsgálattal a termék tiszta tetraciklinnek bizonyult, klórtetracifclm szennyezést legfeljebb 3% alatt tartalmazhat. A tetraciklin hidrátot pH 2-n HCl-toen feloldva és az oldatot liofilizálva igen tiszta tetraciklin hidrokloridot kapunk. Hasonlóképpen a legkülön^ bözőbb tetraciklin savanyú és fémsók nyerhetők a megfelelő sav, ill. bázis alkalmazásával. Tetraciklin sót előállíthatunk oly módon is, ha a tetraciklin megfelelő savval készült vizes oldatát valamely kevéssé poláros oldószerrel (pl. n-butanol) extraháljuk és a leválasztott oldószeres fázist vákuumban bepároljuk. Ekkor a tetraciklin só jó hatásfokkal kikristályosodik. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás tetraciklin előállítására, amelyre jellemző, hogy a tetraciklin termelését levegőztetett mélykultúrában a CDSD—314 jelzésű Streptomyces aureofaciens mutánssal (amelyet 1960. október 31-én az Országos Közegészségügyi Intézetnél 601 102. 1. szám alatt deponáltunk), annak utódjaival, vagy olyan mutánssal végezzük el, amely teljesen azonos módon készült, mint a CDSD—314 jelzésű mutáns. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárással előállított tetraciklin feldolgozása, melyre jellemző, hogy a tetraciklint ferrikomplexének oldatából, a komplexben levő vas valamely bórhidriddel, előnyösen nátriumbórhidriddel történő redukálása után, az oldat betöményítésével tiszta kristályos alakban nyerjük ki. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatóm 620Í87. Terv Nyomda, Budapest V, Balassi Bálint utca 21-23.
