149132. lajstromszámú szabadalom • Eljárás erjesztés útján kapott nystatin tartalmú anyag tisztítására

2 149.132 és az oldat szűrése, majd a metanol lepárlása és az antibiotikum vízzel való kicsapása után a nyers nystatint szennyezi, az antibiotikumot kenőcsös, ragacsos konzisztenciájúvá teszi, mely igen nehezen szárad és nem megfelelő tisztaságú. A kísérleteink során kitűnt, hogy ha az így előállított ragacsos, nyers antibiotikumot az irodalomban ismertetett eljárással, • pl. a 2 865 807 sz. US szabadalmi leírás szerint vizes izopropanolos felszuszpendálássial tisztítjuk, rendkívül nehezen szűrhető termékhez jutunk. A biológiailag aktív anyag tekintélyes része oldatba megy a szennyezésekkel együtt és így elvész. Ugyancsak nem ad megfelelő eredményt a Kleiner és munkatársa által ajánlott módszer sem, melynél az antibiotikumot kloroformmal ieliszapolják. A zsíros, ragacsos, nyers nystatin ugyanis vizet is tartalmaz, mely a zsíros, olajos szennyezések miatt még hosszas szárítással sem távolítható el teljes mérteikben. Az ilyen anyagot kloroformban szuszpendálva a víz jelenléte folytán igen nehezen szűrhető emulzióhoz, ill. nystatin szuszpenzíóhoz jutunk. Úgy találtuk, hogy a nyers nystatint acetonban szuszpendálva az olajos szennyezések oldatba mennek, a szuszpendált nystatin könnyen szűrhető, az oldószer pedig nem tartalmaz nystatint. Ismeretes, hogy a vízmentes aceton igen rosszul oldja, mintegy 2'0% víztartalmú aceton azonban meglehetősen jól oldja a nystatint, úgyhogy a micéliumot vizes acetonnal kivonatolni is lehet. Úgy találtuk, hogy a nyers, olaj- és víztartalmú nystatin igen jól tisztítható acetonnal, ha az acetonos elegy neim tartalmaz 5%-nál több, előnyösen 3%-nál több vizet. Ebben az esetben a szennyezések oldatba mennek, a nystatin azonban nem. A nyers nystatin mintegy 15—20% vizet tartalmaz, ha tehát a nyers nystatint legalább ötszörös, előnyösen mintegy tízszeres mennyiségű vízmentes acetonban szuszpendáliuk, a szennyezések jól eltávolíthatók. A nyers nystatint ilyen acetonos tisztításánál az abban, levő víz szintén oldatba megy, nem keletkezik emulzió, nem úgy, mint a kloroform esetében. Az acetonos extrakció után tetszés szerinti ZiSÍroldószerrel moshatjuk a leszűrt antibiotikumot, pl. acetonnal, kloroformmal. A zsírokat a nystatin mellől a szárított micéliumból is kioldhatjuk közvetlenül a nystatin oldószeres kivonatolása előtt. Ebben az esetben tetszés szerinti zsíroldószer alkalmazható, pl. kloroform, tetrakloretán, benzin, aceton stfo., de itt is előnyös, ha acetont használunk. Valamennyi oldószer a kivonás után desztillálással regenerálható és tisztítás céljaira újból felhasználható. Az eljárást a következő példákkal szemléltetjük: 1. példa: 40 liter erjesztéses oldatból (aktivitása 1,9 g/ /liter/nystatin) kiszűrt 3,35 kg nedves miicéliumot levegőbefúvásos szárítószekrényben 50—60 C°-on megszárítunk. A szárítás időtartama 16 óra. Ily A kiadásért felel: a Közgazdasági módon 1,10 kg száraz micéliumhoz jutunk, mely 6,4% nystatint tartalmaz, ami 70,5 g antibiotikumnak felel meg. A szárított micéliumot 1 órán át extraháljuk 11 liter metanollal, majd a szuszpenziót szűrjük, a metanolos oldatot pedig vákuumban 30 C°-on 700 ml-re bepároljuk. A bepárolt oldathoz 700 ml vizet adunk, az így kivált nystatint szűrjük és 25—80 C°-on levegőn szárítjuk. A micéliumot újabb 11 liter metanollal extraháljuk, amit a következő adag szárított mícélium extrahálására ismét felhasználunk. A levegőn megszáradt nyers, zsírtartalmú nystatin súlya 79,4 g, barnás színű. A nyers terméket 794 ml acetonban egy órán át kevertetjük, majd szűrjük és 100 ml acetonnal vagy ugyanannyi kloroformmal 'kimosva 'Szárítjuk levegőn 25—30 C°-on. A száraz termék súlya 50: g, aktivitása 90%). a standardre vonatkoztatva, amely mg-onként 3500 E-t tartalmaz. Az anyag színe halványsárga. 2. példa: Az 1. példához hasonlóan járunk el, azzal a különbséggel, hogy a száraz micéliumot először 11 liter kloroformmal extraháljuk, majd az 1. példa szerint 11 liter metanollal. A kloroformos oldat nystatint nem tartalmaz. 3. példa: 2,0 kg porított, szárított micéliumot, mely 192 g nystatint tartalmaz, 20' liter vízben szuszpendálunk, egyórás keverés után szűrjük, a szűrőn vízzel, majd 20 liter acetonnal mossuk. A micéliumot ezután szobahőmérsékleten 3 óra alatt megszárítjuk, majd a szárazanyagot 3X7,5 liter metanollal, extraháljuk. Az egyes frakciókat egyesítjük, majd vákuumban 1 literre besűrítjük. A bepárlás közben kivált anyagot szűrjük, kevés acetonnal mossuk és szárítjuk. Az így nyert tennék 110 g, biológiailag 100%-os hatóanyagtartalniú nystatin. Az anyalúgot 1 liter vízbe öntjük, a kivált terméket szűrjük, kevés acetonnal -mossuk és szárítjuk. 38 g 90%-os hatóaiiyagtartalmú nystátinhoz jutunk, mely gyógyászati célokra felhasználható. Az. összes kitermelés. 75%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás erjesztés útján kapott szennyezett nystatintartalmú anyag tisztítására, melyre jellemző, hogy a nystatintartalmú anyagot vízoldható zsíroldószerrel, előnyösen acetonnal kivonatoljuk, majd az így tisztított anyagot nystatinra tovább feldolgozzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy az erjesztéses folyadéktól elkülönített nedves micéliumot, valamint a micéliumfoól kinyert, oldószert tartalmazó nystatint levegő jelenlétében, célszerűen áramló levegővel előnyösen 30—60 C° közötti hőmérsékleten szárítjuk, majd a szárított mioéliumból a nystatint kinyerjük. és Jogi Könyvkiadó igazgatója 610102. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.