149096. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lizergsav-alapú alkaloida elegyek előállítására bioszintézissel
4 149.096 A fermentációt 27 C° hőmérsékleten folytatjuk le. A f érmen to rákba inokulurnként az 1. példában leírt kultúra 400 ml-nyi mennyiségét visszük be. 4—6 napi inkubáció után éri el a termelt alkaloid az optimális mennyiséget, amely. megfelel a 4. példában leírtnak. 6. példa: Az alábbi összetételű táptalajt alkalmazzuk: szorfoit 5 % borostyánkősav 1 % KH2 P0 4 0,1 <y0 MgS04 • 7H2 0 0,03% csicseriborsó-liszt . 1 % desztillált vízben. A táptalaj pH-értékét vizes ammóniaoldattal 5,2-re állítjuk be. A fermentációt az 5. példában leírt módon folytatjuk le. 4—7 napi inkubáció után éri el a termelt alkaloida az optimális mennyiséget, amely megfelel a 4. példában leírtnak. 7. példa: A fermentációt 4 m magas és 0,2 m átmérőjű rozsdamentes acélfermentorokban folytatjuk le. A fermentorok mindegyikébe az alábbi összetételű táptalaj 90 liternyi mennyiségét visszük be: mannit 5 % borostyánkősav 2 % KH2 P0 4 0,1 % MgSQ4 • 7H2 0 0,03% csicseriborsó-liszt 0,1 % desztillált vízben. A tápközeg pH-értékét vizes ammóniaoldattal 5,2-re állítjuk be. A tápoldat sterilizálását egy erre alkalmas másik tartányban végezzük, oly módon, hogy a tápközeg ne kerüljön a gőzzel közvetlen érintkezésbe. Megfigyeltük ugyanis, hogy a vas legkisebb nyomainak jelenléte a tápközegben már az alkaloidtermelés csökkenését idézi elő. A f érmen torokba inokulurnként az 1. példában leírt kultúra 9 liternyi mennyiségét adagoljuk be *A levegőt pórusos kerámiai lemezen keresztül fúvatjuk be a fermentor fenekénél (a tápközeg 1 tf-re számítva 1 tf. levegőt percenként). 6—9 napi inkubáció után ugyanolyan nagy koncentrációban kapjuk az alkaloidokat, mint a 4. példában leírt esetben. 8. példa: A fermentációt rozsdamentes acélfermentorokban folytatjuk le; mindegyik fermentorba 50 liter alábbi összetételű tápközeget viszünk be: mannit 4 % glükóz 1 % borostyánkősav % KH2 P0 4 0.1 % MgS04 • 7H2 0 0,03% desztillált víziben. A tápközeg pH-értékét vizes ammóniaoldattal 5,2-re állítjuk be. A fermentációt rázatás és levegőztetés közben folytatjuk le. 6—9 napi inkubáció után ugyanolyan nagy termelési hányaddal kapjuk az alkaloidokat, amint ezt a 4. példában ismertettük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás oly lizergsav-alapú alkaloida elegyek előállítására, amelyből alkalikus hidrolízis útján ismert módon tiszta lizergsav nyerhető, azzal jellemezve, hogy a Claviceps paspali Stevens—Hall új törzseiből nyert virulens kultúrát alámerülő tenyészetben, aerob feltételek mellett, szervetlen, sókat, nitrogén-forrást és szénhidrátokat tartalmazó tápközegben fermentálunk, míg nagy menynyiségű alkaloid nem képződött, majd a fermentációs léiből az alkaloidokat a nríicéiium kiszűrése után alkalikus közegben kinyerjük és ismert módszerekkel, vízzel nem keveredő oldószerékkel, mint benzollal, kloroformmal vagy metilcükloriddal történő extrakció, vagy ismert adszorbens anyagokkal, mint aktívszén, bentonit stb. történő adszorpció útján tovább tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az új virulens fajtájú törzsekat oly Claviceps paspali fajtáikból nyerjük, amelyeket anyarozs-csírákon kifejlett sclerotiumokfaól kaptunk, a csírázás előtt Claviceps paspali Stevens—Hall kultúrával történő beoltás és ezt követő in vitro tenyésztés útján. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy a Claviceps paspali virulens fajtáinak új mutáns törzseit szelekció vagy mutáció útján nyerjük a törzsek ibolyántúli vagy röntgen-sugarakkal való kezelése révén, vagy pedig különösen mesterséges fertőzés útján, in vitro tenyésztett Graminacea-csirálcról vagy in vivo vagy in vitro, termesztett Grammacea-növényekről. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy szervetlen sókként főként KH2 P0 4 -ot és MgSO 4 -0t alkalmazunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal, jellemezve, hogy nitrogénforrásként főként csicseriborsó-lisztet, szójalieztet, földidiólisztet, bablisztet, lencselisztet, borsólisztet, burgonyalisztet, malátakivonatot vagy hasonlókat, vagy hidrolizált kazeint alkalmazunk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy szénhidrátként főként glükózt, sacharózt, keményítőt, rnannitot, laktózt és/vagy szorbitot alkalmazunk. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt alámerülő kultúrában, rázatás és levegőztetés közben, 4,2 és 6 közötti, előnyösen 5,2 pH-értéken és 22— 30 C°, előnyösen 27 C° hőmérsékleten folytatjuk, le. A kiadásért feiel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 615867.. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
