149096. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lizergsav-alapú alkaloida elegyek előállítására bioszintézissel

2 149.096 tezetnél helyeztük letétbe; e törzsek a következő nyilvántartási jelzéseket kapták: F—140; F—S 13/1; F—237; F—-240. A fentebb említett törzsiek .morfológiai tulajdonságai a következők: a Petri-lemezeken burgonyaglükóz-ágáron kapott kolóniák átmérője 1,5—3 cm, 27 C° hőmérsékleten 10—15 napig történő tenyésztés után. A kultúrák kerek alakúak, folytonos szegélyük van, felületük sima, fehéresszürke levegő-imicéliummal és barna vagy sötét vegetatív rnicéliumrnal. A levegő-rnicélium selymes kül-L > * K.01 noinoz hi-.di J alAu s \ ^ en

yz a -v ig os" tt h fihi ni le or 1 o s •nob, n * '3 j ~4 1 i.rn i b " fii 1 it ím tn^i ) nt k pi j

hi i i') l i _,c 1 i \ n 1 on i b-i cl ll hív rie oi ^ 1 '"t ° > d i ( UC } 1 1+ 1 S S Jp M i uti út )i) l *,\ M a ni 1J i e t i L Ho s e 1 Hí i i k >/\ tf \ 1 i_, i i 1 1 V % 1 11 \ L 3 1 ' A. m It r 1 1 i 'S is) ) c7

>.

x ) ibi 1 1 1 \ _, í í i it c ht 11 \ al i nu i 1 1 7 1 1 ^ l i 1

> ne c p i i 1

í -•"• mm h ni s ( J i í \ 1+ m

L le i niül in i c el ik i es \ x 1 is iba

1 ki ü'o i on 11 e1" vi1

1 0 o- " n í a_ >sc i t i íoi i i csuk; bvp' i\ 1 k i zel i i 7

i i

1

l 1 d k í ohi dt íticie

j— i ) "l -il k i k _, k 's " >ld i n i\ L 1 1 i i oh v na^\ ^ mu / j ) c n i1

7i ' i -, 1 di^e^ul kii í 7i 1 i la ni T

uh u íl in i ni eli m _i ' 711 v ' 1 a^ /J d mu le t x u1

)ii i

ÍJ ' J7c ' s i mi un l

n íl Ami a lizergsav-alkaloidok előállítását illeti, a jelen találmány nem korlátozódik csupán a fentiekben leírt törzsek alkalmazására, hanem kiterjed e mikroorganizmusok pl. szelekció útján nyerhető mutációs alakjaira, valamint az ibolyántúli vagy röntgen-sugarakkal történő besugárzás útján nyert vagy egyéb módon előállított mutációkra, különösen pedig az oly mutációk alkalmazására, amelyeket Graminaceákkal mesterségesen fertőzött csíranövényeken in vitro kitenyésztenek vagy Graminaceákkal 'mesterségesen fertőzött növényeken in vivo vagy in vitro nyernek. A találmány szerinti eljárás kivitele oly módon történik, hogy a fentebb leírt törzsek valiamelyikét aerob feltételek mellett, alámerülő kultúrában, akár laboratóriumi lombikokban, akár ipari ferrnentor-edényekben tenyésztjük, mégpedig szervetlen sókat, initrogéiiforrásokat, valamint szénhidrátokat vagy egyéb e célra alkalmas szénforrásokat tartalmazó vizes tápoldatban; a törzs tenyésztését mindaddig folytatjuk, míg az alkaloidot kellő hozammal nem kapjuk a tápoldatban. Szervetlen sókként alkáli- vagy földalkálifémek, magnézium, vas, cink és/vagy mangán kloridjait, és/vagy nitrátjait és/vagy karbonátjait és/vagy szulfátjait és/vagy foszfátjait alkalmazhatjuk; előnyösen MgSO,4 és KH9PO4 kerül alkalmazásra. A jelen találmány értelmében alkalmazásra kerülő törzsek Fe++

és Zn++ ionokat tartalmazó közegben mutatott viselkedése 'különbözik a Stoll és munkatársai által leírt (a 2 809 920 sz. amerikai s ibadilmi len-»sb n) Cl u iceos puipmea toizsekuh ] 1 ket < lQm [elmTet^ feltűnő modrn csökken 1 dum i sí. i ml t) IkaVicl- ( in t (-Mih< n

c

1

Kei n niiiii s k m 11 cúi 1 t 1 itnito1

i

<- í \ 7 k nt <"i latok ii_t

Í 1 o 1

lii a^h ív hWn / sí 1 TII -i -) k \ c (-7 i \LVP-1 1 hu i ~>]

°ib 1 mi K mint buzi \ i« uko-ULi "sízhei ( Idh to ah *"i vei n 1 t knond ano n o„ i1

isii 1

A Lit It (k Li a1 c 1 't ( ( h 1 o b 1 111 hí _ t S'UiI ] i'-y- ni 1UKO7 ich 1 )' Ki \i\o C'L-^Lin. ai

,oibu, ..iui.n.t, tejcukor ^ib. has-mallia tok. A kultúrák aerob feltételek mellett fejlődnek KI, ^eiuieij vagy IÖKCIII ai^meiuLD -tvan^icürv >a.va.^— jában: e kultúrák lombikban és fermentációs edényekben egyaránt tenyészthetők, adott esetben keverés, valamint levegő vagy oxigén bevezetése közben. A fermentáció 22—30 C°, előnyösen 27 C° hőmérsékleten folyik le, 4,2—8, előnyösen 5,2 pH-értékű közegben. Az alkaloidok termelése általában kétnapi inkubáció után kezdődik meg és 2—9 nap elteltével éri el optimális értékét. A kapott alkaloidok meghatározása a van Urkféle színreakció (Pharm. Weekbled 66, 473, 1929) segítségével történhet, extrakció után, az alábbi módon: a fermentációs levet pH = 8 értékig meglúgosítjuk, majd előbb kloroformmal, majd vizes savoldattal (pl. 1% H2S0

4

vagy 2% borkősav) extraháljuk és azután végezzük el az alkaloid kolorimetriás mennyiségi meghatározását. A kapott alkaloidok elválasztására a szokásos extrakciós eljárásokat alkalmazzuk; szerves oldószerként benzolt, kloroformot, m etilénkloridot vagy hasonlókat alkalmazunk; alkalmazhatunk abszorpciós eljárásokat is lúgos közegben, aktívszén, bentonit vagy más hasonló abszorbens segítségével. A kapott alkaloidkeveréket, amelyben főként lizergsavamidok és izolizergsavamidok vannak jelen, azután alkáliákkal ismert módon hidrolizáljuk lizergsavvá ill. izolizergsavvá (J. Chem. Soc. 1934, 674 és 1936, 1440). ~ «* A találimány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli rriódját közelebbről az alábbi példák szemléltetik, megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre nincsen ezekre a példákra koirlátozva. 1. példa: Az eljárást 500 ml-es lombikban folytatjuk le és ebbe 100 ml tápoldatot viszünk be. A lombikot rázóasiztalon rázatjuk (200 lökettel percenként, 10 cm exeentricitással). Az optimális inkubációs hő-