149063. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta 1-dehidro szteroidok mikrobiológiai átalakítására

149.063 1—4: 20 mg Reichstein-féle S vegyületet 5—8: 20 mg Reicbstein-féle S vegyületet + 0,5 mg 2-metil-l,4-naftoikinont, 9—12: 20 mg Reíchatein-féle S vegyületet + 1,0 mg 2-metil-l,4-naftokinont, A tenyészeteket a táblázatiban megadott időpontban 3-szor 1/3 térfogat etilacetáttal extraháltuk és az extraktumból kvantitatív papírkromatográfia segítségével meghatároztuk a szteroidok mennyiségét. A futtatás etilén-glikol-széntetra-A—IS = /ll-dehidro-Reichstein S vegyület mennyisége 100 ml tenyészetben. A 6. sz. táblázat szerint ha a 2^metil-l,4-naftokinon nincs jelen, akkor a keletkezett /Jl-dehidro vegyület olyan gyorsan eltűnik a tenyészetből, hogy csak nyomokban mutatható ki. Ezzel szemben a 2-metil-l,4-naftoikinon jelenlétében 70— 80%-os termelés érhető el és erősen lassított a termék oxidatív lebontása. 7. példa: Az 1. példában megadott módon készítettünk C. simplex tenyészetet. 100—100 ml 24 órás te-0 12 24 36 48 60 72 Az adatok szerint tehát a /^-naftol a zfl-dehidro-matiltesztoszteron oxidatív lebontását gátolja és kvantitatív termelést tesz lehetővé. Ez a hatás kimutatható már tömény tenyészetben is, de a tetnyészet hígításával egyre kifejezettebbé válik. A magas átalakítási értékek olyan hosszan konzerválódnak, hogy biztonságos üzemeltetést tesznek lehetővé. Szabadalmi igénypontok: 1, a 148 093 sz. törzsszabadalom 1., 3., 4., 16., 17., 18. számú igénypontjaiban meghatározott elklorid-diklőretán rendszerben történt, a szteroidok mennyiségét eluálás után a 242 m/t^nál nyújtott elnyelés alapján standard görbéről állapítottuk meg. Az eredményeket a 6. sz. táblázat mutatja be. -•; lozc-t'hrz adagoltunk 20—20 mg metiltesztoszteront úgy, hogy az 1. és 2. jelű lombikban a tömény tenyészetet alkalmaztuk, a 3. és 4. jelű lombikban steril vízzel 10-szeresre hígított tenyészetet, az 5. és 6". jelű lombikban pedig steril vízzel 30-szor meghígított tenyészetet alkalmaztunk. A 2., 4. és 6. jelű lombikhoz a metiltesztoszterónnal egy időben 2—2 mg ß-naftolt is adagoltunk. A keletkezett /f-1-dehidro-metiltesztoszteron mennyiségét kénsavas kromogénképzés alapján mértük, 200 y/ml zíl-vegyület 0,940-es extinkciót adott meghatározási módszerünkben. Az eredményeket a 7. sz. táblázat mutatja be. járás továbbfejlesztése /(l-es kettőskötést tartalmazó szteroidok előállítására, azzal jellemezve, hogy Corynebacterium simplex segítségével különféle zf4,3-keto-szteroidokat — /(-4-androszténdiont, metiltesztoszteront, Reichstein-féle S vegyületet, kortizont, hidrakortizont oxidáltatunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a Corynebacteirium simplex tenyészetet az oxidáláskor hígítva, előnyösen mintegy 25—30-szorosára hígítva alkalmazzuk. Tenyészet kora órákban az adagolás után 1—4 6. sz. táblázat 5—8 9—12 S* J_1__S zl—1—S 12 2,36 mg nyom —• 14,4 mg 24 — nyom —' 13,76 mg 48 — nyom —• 12,96 mg 72 — S nyom —• 9,68 mg * S = Reichstein-féle S vegyület mennyisége 100 ml tenyészetben zí—1—S 16,2 mg 13,2 mg 13,6 mg 12,0 mg 7. sz. ra 1. 2. 0,089 0,080 0,258 0,650 0,010 0,054 0,038 0,036 0,060 0,040 0,048 0,035 0,032 0,030 táblázat-3. 4. t e n y é s z 0,079 0,076 0,574 0,735 0,610 0,758 0,630 0,910 0,519 0,940 0,438 0,945 o's28 0,940 5. 6. t 0,071 0,080 0,598 0,560 0,515 0,735 0,448 0,760 0,050 0,820 0,048 0,900 0,032 0,940 Tenyészet kora i órákban adagolás után A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 615864. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utoa 21-23.