148963. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új nagyhatású antibiotikum előállítására

148.963 5 Jellemző reakció a NaOH, vagy bármely más lúg hatására fellépő cseresznyepiros színeződés, mely kb. 24 óra alatt barnába megy át. Az oldatot megsavanyítva a szín eltűnik, de az aktivitás nem tér vissza. Savas hidrolízis céljából kb. 15 mg mintát 5 ml 20% sósavban olajfürdőn 110 C°-on főztünk 4 órán át. A hidrolizátum gyenge ninhidrin reakciót ad. Papírkromatográfiásan vizsgálva egy aminosav jelenléte állapítható meg (valószínűleg a- vagy ^-alanin). Fentiek szerint a K 152 jelzésű Streptomyces törzs fermentlevéből izolált antibiotikum az irodalomban leírt vegyületek közül leginkább japán szerzők által Gancidin néven közölthöz hasonlít (J. Antibiotios 9, 97, 1956; 11, 150, 1958, Japán). Fenti anyagtól való eltérés az elementáranalízisben jelentkezik, aminek kiértékeléséből arra lehet következtetni, hogy az általunk izolált anyag feltehetően a japán szerzők által leírt anyagból két mol víz lehasadásával vezethető le. Eltérés tapasztalható az ellenáramú megoszlás esetében is, ahol az általunk is használt rendszer az anyag maximumát a Gancidin esetében 40 csöves készülékben a 21—22. csőben, míg mi a K 152 esetében a 2. csőben találtuk. A K 152 LDso értékét intravénás adagolás esetén 60 000—120 000 E/kg-nak találtuk, a perorális adagolásnál a LD50 értéke 400 000 E/kg. Klinikai anyagból izolált, az összes használatban levő antibiotikumokra rezisztens Staphylococcus növekedését 0,04—0,26 E/ml koncentrációban, gátolta, ami 0,01—0,001 y/ml koncentrációnak felel meg. A fentiek szerint a K 152 egy rendkívül módon aktív, de toxikus antibiotikumnak bizonyult, melynél azonban a terápiás dózis és a toxikus dózis közötti tág határ az adagolást lehetővé teszi. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás új széles spektrumú antibiotikum kinyerésére a K 152 jelzésű és az Országos Közegészségügyi Intézetnél 60/205. 3. sz. alatt letétbe helyezett Streptomyces törzs, valamint mutánsainak és variánsainak fermentlevéből, azzal jellemezve, hogy a törzset szénhidrát, fehérje és ásványi só tartalmú táptalajon 24—30 C° között kevertetés és levegőztetés mellett tenyésztjük és a fermentáció 40—80. órájában a megsavanyított oldatot a micéliumtól elkülönítve az oldatból a hatóanyagot kinyerjük. 2. Az 1. alatti igénypont foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot a fermentléből vízben nem keveredő szerves oldószerrel, célszerűen kloroform, benzol, vagy toluol felhasználásával pH = 7 mellett extraháljuk, majd azt szerves oldószerből savanyú vízbe rázzuk vissza. 3. Az 1. alatti igénypont foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentléből a hatóanyagot szénen adszorbeáltatjuk, majd savanyú vizes acetonnal leoldjuk. 4. A 2—3. alatti igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyert anyag tisztítását kromatografálással, célszerűen alumíniumoxid felhasználásával végezzük. 5. A 2—3. alatti igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyert anyag tisztítását ellenáramú megoszlással, célszerűen kloroform és savanyú puffer oldat közötti megosztással végezzük. 6. A 4—5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyert anyag tisztítását pikrát képzéssel, mely a szokásos módszerrel klórhidráttá alakítható át, végezzük. 7. A 4—5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyert anyag további tisztítását éteres oldatból történő klóríidrát képzéssel végezzük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 614374. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.