148961. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új bázikus jellegű antibiotikum előállítására
I 148.961 3 aktivitású oldatokból 3500 cm3 -t egyesítve neutralizáltunk, majd 10 500 cm3 acetont hozzáadva olaj válik ki. Ez az olaj a szennyező inaktív anyagokat tartalmazza, kevés aktivitást magával ragad, ami víz-aceton 1:3 elegyének segítségével belőle kioldható. A fenti 75%-os vizes acetont oldatokhoz egyenlő térfogatú vízmentes acetont adva olaj válik ki, amely acetoninal tovább mosva porrá esik szét. A fenti oldatok feldolgozásából azonban 270 g anyag nyerhető, amelynek aktivitása 120 E/mg. Az anyag további tisztítása szenezéssel, AI2O3, keményítő, vagy cellulóz oszlopon való kromatografálással történhet. Leghatásosabbnak a 2:1 arányú szén : kovaföld keveréken való kromatografálás bizonyult. 1 g K 63 120 E/mg aktivitású anyagot 10 g szén-kovaföld keverékre vittünk fel vizes oldatban. A szén az aktivitást megkötötte. Eluálást pH-3 érték mellett vízzel, sósavval végeztük és bepároltuk, majd metanolból történő átcsapással hamumentesítettük. Ezúton az aktivitás 36,4%-át 500 E/mg, 27%-át 456 E/mg és 36%-át 9 E/mg anyag formájában kaptuk. A száraz maradékot absz. metanolbán felvéve 12-szeres acetonnal kicsaptuk. A fenti anyag, amely az eddig kapott legtisztább termék volt, az alábbi adatokkal jellemezhető. Elementar analízis: C = 39,81% H = 7,3% N = 16,1%: Cl= 17,36% Van Slyke nitrogén = 4,94% hamu = 0,48%. Fehling reagenssel, FeÖ3 oldattal Sakaguehi, Mollisich reagenssel nem reagál. Morgan—Elsőn reakciója pozitív. A hidrolizátum pozitív Fehling és Morgan—Elsőn reakciót ad, ninhidrinnel papírkromatográfia futtatás után 4 folt mutatható ki benne. Az antibiotikum vizes etanolos közegben NaHCO3 jelenlétében dinitrofluorbenzol hatására sárga csapadékot ad, amely formamidban és piridinben oldódik, reakció közben azonban aktivitását elveszítette. A dinitrofenil származékot 20%-os sósavval hidrolizáltuk és éterrel kirázva az éter es extraktumot pufferolt szilikagél oszlopon kromatografáltuk. Az oszlopon négy komponens vált el egymástól. A hatóanyag jellemző ultraibolya spektrumot nem ad, fényelnyelése fokozatosan nő 400 m/x-tól 260 mf-ig haladva, 340 mjn-nál kis csökkenést, mutat, majd innen kezdve meredeken emelkedő végelnyelést ad. A maximális aktivitású anyagot piridin-butanolvíz-ecetisav (10 : 15 : 3 : 12) rendszerben futtatva öt biológiailag aktív foltot ad, amelyeket eddig preparatív úton különválasztani nem sikerült. A K 63 eddig rendelkezésre álló adatait összehasonlítva az irodalomban eddig leírt antibioti-A Kiadásért felél: a Közgazdaság 614874. Terv Nyomda, Budapest kumokkal, egyikkel sem lehetett azonosítani, legközelebb a neomycin csoport antibiotikumaihoz áll. A mikrobiológiai spektrumát pH-7,8-nál tápagaron vizsgáltuk, ahol 1 gamma/cm3 koncentrációban az alábbi baktériumokra fejtett ki gátló hatást: B. cereus 568/H, Staphylococcus aureus sensible a tout. Staphylococcus aureus III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X. S. typhi O. S. paratyphi B, C, D, S. breslaui, S. newport, S. meleagridis, B. pyocyaneus, 0 I, III, IV, Sh. Flexner, Sh. Sonnei, Sh. London, Sh. Smitz, B. Pneumobac. Friedländer, Micrococcus ureae, E. Coli S, Staph, aur. Duncan. Dubos táptalajon a tbc bacillus növekedését 2,5 gamma/ml koncentrációban gátolta, amikor hasonló kísérleti körülmények között a streptomycin 5 gamma/ml koncentrációban gátol. A K 63 LD50 értéke i. v. adagolás mellett fehér egereken 30 000 E/kg, krónikus adás esetén az állatok egyre fokozódó érzékenységet mutatnak és 6 napi adagolásnál 2500 E/kg napi adagot sem bírnak el. Az antibiotikum a beadás helyén szövetkárosító hatást mutat, azonban a rákos szövetek növekedésére speciális gátlás kimutatható nem volt. A fenti szabadalomban egy új bázikus jellegű, mikrobiológiai fermentáció útján előállított antibiotikum fermentálási technológiát, bekoncentrálását, tisztítását adtuk meg. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás széles spektrumú antibiotikum kinyerésére a K 63 és az Országos Közegészségügyi Intézetben 60/205, 2. sz. alatt letétbehelyezett Streptomyces törzs, valamint mutánsainak és variánsainak íermentlevéből, azzal jellemezve, hogy a törzset szénhidrát, fehérje és ásványi só tartalmú táptalajon 24—30 C fok között kevertetés és levegőztetés mellett tenyésztjük és a fermentáció 80—120 órájában a megsavanyított oldatot a micéliumtól elkülönítve a hatóanyagot kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a hatóanyag elkülönítését kationcserélő gyantán történő megkötéssel, majd savval való leoldás után a neutralizált oldatból acetonos kicsapással végezzük. 3. A 2. igénypont, szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az acetonos kicsapást és a hatóanyagnak az inaktív anyagtól való elkülönítását az oldószernek részletekben való hozzáadásával végezzük. 4. Az előző igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az előállított anyag tisztítását aktív szénen történő kromatografáláesal végezzük. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatból szénen megkötött hatóanyagot savval leoldjuk, majd a szárazra párolt anyagot metanolban feloldva acetonnal kicsapjuk. i és Jogi Könyvkiadó Igazgatója. V., Balassi ßalint utca 21—23.
