148864. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 16-metilénszteroidok előállítására

4 148.864 'kristályosítjuk. A tiszta 16/?-metil-16a,17«-oxido-5-pregnen-3ß-01-20-on (II. sz, képlet, Ri=H) 185—186°-on olvad, (oc)D—24,6° (kloroformban). b) A II. sz. vegyület (Rí = H) acetilezése. Az a) alatt kapott vegyületet 120 ml piridinnel és 120 ml ecetsavanhidriddel 1 óra hosszat gőzfürdőn melegítjük. Az oldatot vízbe öntjük és a kicsapódott 16/?-me!til-16«17«-oxido~5-pregnén-3(M)l-20-on-3-acetátot (H. sz. képlet, Rí == acetil) leszívatjuk. O. p.: 178—180°, («)D—12,0° (kloroformban). ; ci) A II. sz. vegyület (Rj = acetil) brómhidrogénes felhasítása és brómmentesítése. 3 g 16/'>

-metil-16«,17«-oxido-pregnenolon-acetátot 50 ml dioxán és 50 ml éter elegyében feloldunk, kavarás közben kb. —10°-ra lehűtünk és 3 brómhidrogénnek kb. 35%-os éteres oldata 10 ml-ét adjuk hozzá. Az elegyet 0° alatt, 4 órán át kavarjuk, majd kb. 200 ml, Raney-nikkel felett desztillált alkohollal felhígítjuk. A brómhidrogénfelesleg eltávolítására 5 g kálciumkarbonátot adunk hozzá. Az oldatot a 0° alatti hőmérsékleten 30 percig továbbkavarjuk. Az így nyert szuszpenziót hozzáadjuk kb. 200 ml alkoholban feliszapolt 9 g előredukált 2%-os palládium-kálciumkarbonát-katalizátorhoz és 0°-ra való hűtés közben, légköri vagy csekély túlnyomás alatt a hidrogénfelvétel megszűnéséig hidrogénezzük. Az elegyet a katalizátorról leszűrjük, metanollal utánamossuk, a szürletet vákuumban bepároljuk és a maradékot, amely 16-metilén-5--pregnén-3/?,17«-diol-20-on-3-acetátból áll (III. sz. vegyület) metanolból és aeetonfoól átkristályosítjuk. O. p. 196—198°, (a)D—140° (kloroformban). c2

) A II. sz, vegyület (Rí = acetil) epoxid-felhasítás. A II. sz, epoxid 9,3 g-ját 350 ml vízmentes benzolban oldjuk és hozzáadunk 630 mg p-toluol-Bzulfonsavat és az egészet, visszafolyásra állított hűtővel felszerelt lombikban 4 óra hosszat forraljuk. Lehűlés után a benzoics oldatot 5%-os nátriumhídrokarbonát-oldattal és vízzel mossuk, megszárítjuk és bepároljuk. A kristályos 16-metilén-5-pregnén-3/5,17«-diol-2'0-O!n-3-acetát (III. R, = acetil) metanolból átkristályosítva 196— 198°-on olvad. d) A III. képletű vegyület (Rí = acetil) 21-acetoxilezése. 1,55 g 16-metilén-5-pregnén-3^,17«-diol-20-on-3--acetátot feloldunk 60 ml jégecet és 15 ml kloroform elegyében. Az oldathoz 20 perc leforgása alatt 5° -on, néhány csepp jégecetben oldott brómhidrogént, majd kavarás köziben brómnak jégecetben való 2%-os oldatát csepegtetjük. Ezután még fél óra hosszat kavarjuk, majd vízbe öntjük, éterrel kivonatoljuk és az éteres oldatot vizes nátriumhidrokarbonát-oldattal semleges reakcióig mossuk. A náxtriumszulfát felett megszárított oldatot vákuumban bepároljuk. Az 5,6,21--tribromid olaj alakjában marad vissza és azt tisztítás nélkül tovább feldolgozzuk. Az olajat 60 ml acetonban oldjuk, hozzáadunk 1,5 g nátriumjodidot és 6 g vízmentes káliumacetátot, majd visszafolyásra állított hűtővel felszerelt lombikban 4 óra hosszat forraljuk. Lehűtés után az oldatot a szervetlen sóról leszűrjük és a szűrletet vákuumban besűrítjük. A maradékot kloroformban oldjuk, az oldatot vízzel háromszor kirázzuk, vákuumban bepároljuk, a maradékot benzolban oldjuk, és az oldatot magnéziumszilikáton -(pl. a FLORISIL néven kapható készítményen) kromatografáljuk. A benzol-kloroformos 1:1 arányú eluátum bepárlása után a IV. képletű diacetát (Rí = R2 = acetil) marad vissza és acetonból átkristályosítva tiszta állapotban kinyerhető. O. p. 195—197°, (a)D

—65,7° (kloroformban). e) A IV. képletű vegyület (Rí — R2 = acetil) mikrobiológiai elszappanosítása. Csíramentesített tápoldatot készítünk, amely 80 g glukózt, 50 g élesztőkivonatot és 30 g ammóniumkloridot tartalmaz, Csapvízzel 10 literre egészítjük ki és pH-ját Sörensen-féle 1/30-moláris foszfátpufferoldattal 7,0-re állítjuk be. Ezután beoltjuk Flavobacterium dehydrogenans rázótenyészetének 200 ml-ével. A tenyészetet 12 órán át, kavarás és levegőztetés közben 28°-on szaporítjuk. Ezután hozzáadjuk a IV. képletű diacetát 12 g-ját, acetonban vagy aceton és dimetilformamid 1 : 1 arányú elegyében oldva és a tenyésztési körülményeket további 10 órán át változatlanul fenntartjuk. Ezután az oldatot kloroformmal többször kivonatoljuk, a kloroformos oldatokat megszárítjuk és bepároljuk. A bepárlási maradékot átkristályosítássial megtisztítjuk. Tiszta 16-metilén-4-pregnén-17a,21-diol-3,20-diont (V. a. képletű vegyület, R2 = H) kapunk, o. p. 207°, (a)D

+46,6°

(kloroformban) / max

240 m>, E

10

/° 1 cm = 480. 2. a) Az V.a képletű vegyület (R2

= H) ll/

3

-hidroxilezése. Kisméretű fermentorba 15 1 tápoldatot helyezünk, mely 5% malátakivonatot, 1% szacharózt, 0,2% nátriumnitrátot, 0,1 dikáliurnfoszfátot, 0,05% magnéziumszulfátot, 0,05% káhumkloridot és 0,005% ferroszulfátot tartalmaz és pH-ja 7,0-ra van beállítva, beoltjuk a Cürvularia lunata (Wakker)—Boadijn rázótenyészetének 800 ml-ével. A tenyészetet kavarás és erős levegőztetés közben 28°-on fermentáljuk. 24 órai tenyésztés után hozzáadjuk az 1. példa szerint előállított V.a képletű vegyület (R2

= H), azaz a Reichstein-féle S-szubsztancia 16-metilénszármazéka 5 g-ját 40 ml dimetüformamidban oldva. A bekövetkező reakciót papírkromatográfiailag" ellenőrizzük. Ha a papírkromatogramban további kiindulási anyag többé ki nem mutatható, a tenyészetoldatot, azonos térfogatú kloroformmal, háromszor kivonatoljuk. Az egyesített kloroformos oldatokat bepárologtatjuk és a maradékot, a kísérőanyagok eltávolítása végett kovasavgél oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot kloroform és ecetészter 1 : 3 arányú elegyével eluáljuk, az eluátum a kívánt 16-metilén-hidrokortizont (VI.a vegyület, llß-OH, R2 = H)tartalmazza és abból a szokásos módon kinyerhető. O. p. 224—225°, (*)D

+69,2° (dioxán-1% ban) /241 ma%

m/j,, E1

'

cm

466. b) A Vl.a képletű vegyület (llA-OH, R2

= H) acetilezése. 5 g 16-metilén-hidrokortizont 30 ml piridinnel és 30 ml ecetsavanhidriddel 1 óra hosszat gőz-