148178. lajstromszámú szabadalom • Eljárás farmakológiailag hatásos alfa-poliglutaminsav származékok elkülönítésére
2 148.178 képletű vegyület in vitro a Staphylococcus—Wood törzs növekedését már 5 y/ml-es koncentrációban gátolja. (A képletben a —OH csoport helye a polimerizációs egységen belül különböző lehet.) A 147 586 sz. törzsszabadalom továbbfejlesztéseként azt találtuk, hogy a-poliglutaminsavnak etiléndiaminnal, vagy N-alkiletiléndiaminokkal, vagy guanidinnal való amidálásakor keletkezett termékből a farmakológiailag hatásosabb komponens elkülöníthető, oly módon, hogy a termék vizes oldatát kationcserélő műgyantával kezeljük. Az ioncserélő gj?anta hatására a keverék bázisosabb része a gyantán megkötődik, míg a kevésbé bázisos, farmakológiailag hatásosabb rész oldatban marad és onnan kinyerhető. Előnyös, ha az ioncserélővel való kezelést pH = 5—6-on végezzük el. Célszerű műgyantaként erősen savas kationcserélőket pl. Amberlite I. R., Dowex 50 stb. gyantákat alkalmazni. Az amidálást, illetőleg a poliglutaminsav-amin keveréket a Cl—275, ül. Cl—276 alapszámú magyar bejelentések szerint végezzük el. (ahol a három A-ból kettő egy-egy —HN(CH2)2 -NH2 -HC1 és egy A —OH-gyököt jelent). Ez a készítmény papírelektroforetikus vizsgálatban (8 mA. 220 Volt, pH = 3,5 acetátpuff er elegyben 5 órán át futtatva) homogénnek mutatkozott. Papírkromatogramja butanol-jégecet-víz 4:1:5 arányú elegyében vizsgálva, 24 óra múlva is csak egy frakciót mutat. 2. 100 mg a-polyglutaminsav-y-(2-amino-etilamid —HCl) keveréket, mely in vitro a Staphylococcus—Wood-ra 10—20 y ml-es koncentrációban hatásos, 10 ml vízben oldunk és az, oldatot 2,5 g Dowex 50 • H-ciklusú gyanta-oszlopon átengedjük. Az oszlopot 5 ml deszt. vízzel mossuk, majd a sósavfelesleg eltávolítása céljából dializáljuk. Az így nyert odatot beszárítjuk és a maradékot súly(ahol a három A-ból kettő egy-egy —OH és egy A — NH(CH2 ) 2 N—(CH 3 ) 2 • HCl-gyököt jelent). 4. 6 g guanidin-bázisnak 4 ml metanol és 6 ml vizes oldatába keverés közben 1 g a-poliglutaminsav-metilésztert adunk. Az észter rövid idő múlva feloldódik. 24 órai állás után a reakcióelegyet hűtés közben 5 norm, sósavval pH = 6-ra állítjuk. Az eljárás foganatosításakor az oldatból a termék kinyerése úgy történik, hogy a savat az oldatból eltávolítjuk, előnyösen dialízissel, majd az oldatot beszárítjuk. Eljárásunk további részletei a példákban találhatók. Példák: 1. 2 g a-poliglutaminsav-metilészter és etiléndiarnin felhasználásával nyert reakcióelegyegyből az atnin-felesleget vákuumban vízfürdőben ledesztilláljuk. A maradékot vízben felvesszük és annyi hígított sósavat adunk hozzá, hogy az oldat pH-ja 5—6 legyen. A 60 ml térfogatú oldatot 20 g H-ciklusú Amberlite I. R. 120-as műgyantaoszlopon átengedjük és azután a gyantát kloridionmentesre mossuk. Az oldatot dializáljuk addig, míg a pH 5,2 nem lesz. Azután vízfürdőben vákuumban beszárítjuk. A maradékot abs. alkoholban felvesszük, szűrjük, majd foszforpentoxid fölött szárítjuk. Súlya: 1 g analízise: C = 42,26, 42,48%, H = 6,84, 6,73%, N = 18,53%, Cl =12,86. 12,96%,. Ennek alapján a termék képlete: állandóságig szárítjuk. 59,3 mg terméket nyerünk, mely az 1. példában leírt termékkel azonos és in vitro 5 y/ml-es koncentrációban hatásos. 3. 0,45 g «-poliglutaminsavval acilezett N,N-dimetil-etiléndiamin keveréket 15 ml vízben oldunk, azután 5 g OH-ciklusú Dowex II. gyanta-oszlopon átengedjük. A kloridion-mentes oldatot 10%-os ecetsavval pH = 5-re állítjuk, azután 5 g H-ciklusú Amberlito I. R. 120-as gyantával kezeljük. A műgyantát vízzel addig mossuk, míg a lecsepegő rész pH-ja 5,8 nem lesz. A vizes részt híg sósavval pH 2-re állítjuk és dializáljuk. A szokásos módon feldolgozva és foszforpentoxid felett szárítva, 0,1 g terméket nyerünk, melynek analízise C = 45,57%, H = 7,56%, N = 15,4%, Cl = 7,87%. Ennek alapján képlete: azután 12 óráig dializáljuk, majd 50 g H-ciklusú Amberlite I. R. 120-as gyantával keverjük. Az így nyert oldatot dializáljuk, majd vízfürdőben vákuumban beszárítjuk. A maradékot absz. alkoholban felvesszük, szűrjük és foszforpentoxid fölött szárítjuk, 0, 36 g terméket nyerünk, melynek analízise alapján képlete: H NH—CH—CO—NH—CH—CO—NH—CH—CO! I I (CH2 ) 2 (CH2 ) 2 (CH2 ) 2 CO CO CO A A A OH H NH—CH—CO—NH—CH—CO—NH—CH—COI I I (CH2 ) 2 (CH2 ) 2 (CH2 ) 2 I I I CO CO CO I I I A A A HO
