147613. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11 alfa-oxiszteroidok előállítására
147.613 eió) után — történő létesítése egyidejűleg is lehetséges, ha ortohangyasavészterrel való kezelés útján először a 3-enolétert állítjuk elő, majd az így kapott vegyületet klóranillal kezeljük. Ennek során simán lefolyó reakcióban kapjuk a megfelelő 1,4,6-pregnatriént. A találmány szerinti eljárás ily módon lehetőséget nyújt arra, hogy simán végbemenő reakcióval és jó termelési hányaddal vezessünk be egy oxigén-funkciót a szteroid-molekula lle-helyezetébe, anélkül, hogy ennek során zavaró melléktermékek keletkeznének, amelyek eltávolítására bonyolult tisztítási eljárásokat kellene alkalmazni. Különösképpen lehetővé teszi a találmány szerinti eljárás azt is, hogy az S-Reichstein-anyagot két lépésben kortizonna vagy 3 lépésban prednizonná alakítsuk át. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját közelebbről az alábbi példák szemléltetik: 1. példa: A 2083 sz. törzs [Fusarium equiseti Saccardo var. bullatum (Sherbakoff) Wollenweber] 200 ml rnalátakjvonatot és peptont tartalmazó táptalajon (2% malátakivonat, 0,2% peptoii kazeinből), 1000 mles Erlenmeyer-lombikban tenyésztett rázott kultúrájához. 24 órai inkubáció után 100 mg Reichstein-féle S-anyagot adunk 4 ml metanolban oldva. További 24 órai inkubáció után, amelyet 28 C° hőmérsékleten folytatunk le, a fermentációs oldatot kloroformmal kirázzuk, a kloroformos kivonatot megszárítjuk és szilárd maradék képződéséig bepároljuk. A papírkromatográfiai vizsgálat (Bj és EM oldószer-rendszerrel, I. E. Bush szerint, Biochemical Journal, 50, 370 (1962)) azt mutatja, hogy a termékben egyedüli szteroidként 11-epi-hidrokortizon van jelen (ez autentikus 11-epi-bidrokortizonnal való összehasonlítás útján igazolható). 2. példa: Egy 13 liter űrtartalmú kis fermentorba. 10 liter tápoldatot (az 1. példával azonos összetételben) viszünk be és ezt a 2083 sz. törzs [Fusarium equiseti Saccardo var. bullatum (Sherbakoff) Wollenwéber] 750 ml-nyi rázott kultúrájával beoltjuk, majd 24 órai inkubációs idő után, amelynek sorén a tápoldatot erélyesen kevertük és szellőztük (600 liter levegővel óránként), 5 g Reichsteinféle S-anyag 200 ml metanollal készített oldatát adjuk hozzá. Az inkubációt még 25 óra (hosszat folytatjuk, ezalatt papírkromatográfiai vizsgálattal állandóan követjük a reakció lefolyását. Utána a tápoldatot többször kirázzuk kloroformmal, a kloroformos kivonatot megszárítjuk és 80 ml térfogatra bepároljuk. Lehűlés után 3,2 g gyengén sárgás színű nyerstermék kristályosodik ki, amely acetonból való egyszeri átkristályosítás után teljesen tiszta 11-epi-hidrokortizonnak bizonyul. Op. 210—213 C°, («)D = +117° (etanol). amelv tápoldat 2% 0,5%" glükózt, 0,5% szójalisztet, /o élesztőkivonatot, 0,5% primer káliumfoszfátot és 0,5% nátriumkioridot tartalmaz (Fr. Hanson és munkatársai, J. Am. Chem. Soc., 75, 5369 (1953)) — 24 órai inkubáció után 100 mg 1-dehidro-Reichstein-S-arryag 4 ml metanollal készített oldatát adjuk. További 24 óra múlva a fermentációs oldatot az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel. A papírkromatográfiai vizsgálat azt mutatja, hogy a kiindulóanyag k;b, 80%-os termelési hányaddal egy új anyaggá alakult át, amely papírkromatográfiai viselkedése alapján 11--epi-prednizolonnak minősíthető. b) Egy 13 liter űrtartalmú kis fermentorba 10 liter tápoldatot (Fr. Hansen és munkatársai szerinti összetételben, mint a 3a. példában) visszük be és ezt a 2082 sz. törzs [Fusarium equiseti Saccardo var. bullatum (Sherbakoff) Wollen weber] 250 ml-nyi rázott kultúrájával' beoltjuk, majd 24 órai inkubáció után, amelynek során a tápoldatot erélyesen kevertük és szellőztük (600 liter levegővel óránként), 1-deíhídro-Reichstein-S-anyag 200 ml metanollal készített oldatát adjuk hozzá. Állandó papírkromatográfiai ellenőrzés mellett további 28 óra hosszat folytatjuk a fermentációt. Utána a fermentációs oldatot többször kirázzuk kloroformmal, a kloroformos kivonatot megszárítjuk és kis térfogatra pároljuk be. Lehűlés közben nyers ll-epi-prednizoíon kristályosodik ki, amely acetonból való átkristályosítás után tiszta állapotban nyerhető ki. Op. 206—208 C°, (a)D = +76° (dioxán). Az ily módon kapott 11-epi-prednizolont önmagában ismert módszerekkel, a 21-monoacetáton át prednizonná vagy prednizolonná alakíthatjuk át. 4. példa: A 2083 sz. törzs [Fusarium equiseti Saccardo var. bullatum (Sherbakoff) Wollenweber] rázott kultórájáhioz, amelyet a 3. példa szerinti előzetes kezelésben részesítettünk, 100 mg 1,4,6-pregnatrién-17a:,21-diol-3,20-dion 4 ml metanollal készített oldatát adjuk. 24 órai további fermentáció után a 3. példa szerinti módon dolgozzuk fel a fermentációs oldatot. A papírkromatográfiai vizsgálat tanúsága szerint csaknem mennyisági átalakulással kapjuk a terméket, amely kromatográfiai viselkedése alapján 6-dehidro-ll-epi-prednizolonként azonosítható. 5. példa: Az 1. példa szerinti módon hajtjuk végre a kísérletet, de 2070 sz. t. (Fusarium, Sectio Discolor) alkalmazásával. A papírkromatográfiai ellenőrzés azt mutatja, hogy kizárólag 11-epi-hidrokortizon keletkezik, az átalakulás 24 órai fermentáció után mennyiségileg megy végbe. 6. példa: 3. példa: a) A 2083 sz. törzs [Fusarium equiseti Saccardo var. bullatum (Sherbakoff) Wollenweber] 200 ml tápoldatban tenyésztett rázott kultúrájához — Az 1. példa szerinti módon hajtjuk végre a kísérletet, de a 2074 sz. törzs (Fusarium, Sectio Discolor) alkalmazásával. 24 órai fermentáció után csaknem mennyiségi termeléssel 11-epi-hidrokortizon képződik.
