147324. lajstromszámú szabadalom • Egyszerű eljárás tripszin kinyerésére insulinmentes hasnyálmirigy maradékból

Megjelent: 1960. július 30. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 147.324. SZÁM 12. p. 11-17. OSZTÁLY — GO-690. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY Egyszerű eljárás tripszin kinyerésére insulinmentes hasnyálmirigy maradékból Gyógyszeripari Kutató Intézet, Budapest Feltalálók: dr. Bagdy Dániel (50%), Battyán Györgyné (50%) A bejelentés napja: 1959. május 8. Jelen találmány a hasnyálmirigy egyik legfontosabb fehérjebontó enzimének, a tripszinnek insulinmentes hasnyálmirigy maradékból történő egyszerű kinyerésére vonatkozik. Mint ismeretes, az. emlős állatok hasnyálmirigye az insulinon kívül még számos, biológiailag aktív hatóanyagot tartalmaz. Ezek között különleges jelentőségűek a külső elválasztású mirigyek által termelt enzimek, amelyeknek gyóigyászati és ipari felhasználása egyaránt mindinkább előtérbe került az utóbbi évek folyamán. Érthetők tehát azok a törekvések, amelyek a fontos biokatalizátorok előállítását minél egyszerűbbé és gazdaságosabbá kívánják tenni. A gazdaságosság egyik legfontosabb szempontja az, hogy a fent említett enzimeket, vagy azok bármelyikét olyan nyersanyagból kiindulva állítsuk elő, amelyből az insulint előzetesen már kinyerték. Ennek lehetősége adva van, hiszen a vércukorszintet csökkentő hormon kivonása általánosságban olyan szerves oldószerrel történik, amelynek jelenlétében az enzimek a megőrölt szervben visszamaradnak, s a magas alkoholkoncenttráció hatására nem mennek tönkre, csak reverzibilisen inaktív állapotba kerülnek. Következésképpen a szerves oldószer töménységének megfelelő alacsony szintre csökentése útján természetes állapotukba visszavihetők és kinyerhetők. Az enzimek, így a tripszin insulinmentes hasnyálmirigy maradékból történő előállításának kezdeti legegyszerűbb lépése tehát a magas alkoholtartalmú szervmaradék alkoholtartalmának csökkentése. Ezt a célt a. 2 686 148 sz. amerikai szabadalom úgy éri el, hogy nagy mennyiségű vízzel, a nyersanyag súlyára számítva hat-tizenkétszeres térfogattal keveri a savanyú hasnyálmirigymaradékot: a lehűtött keveréket azután ismételten fellhaboztatja, hogy a zsírnemű szenynyezéseket eltávolítsa. E műveletek kivitelezése során azonban a kivonási térfogat tetemesen megnő, ami semmiképpen sem előnyös és gazdaságos a következő kisózásos frakcionálási lépések szempontjából. Egy másik eljárás (U. S. P. 2 751 329) a szervmaradók ismételt hideg kútvizes kimosását és centrifugálás útján történő elkülönítését ajánlja az alkoholkoncentráció 4 térfogatszázalék alatti értékre történő1

leszállítása érdekében. Ez a módszer a kivonás előtt alkalmazott előkészítő lépések miatt nehézkes és hosszadalmas. Egy további szabadalom (U. S. P. 2 758 055) a szerves oldószer részleges, 20 térfogatszázalék értéikhatár alá való csökkentését vizes hígítás és vákuunideszitilláció együttes alkalmazásával oldja meg. Jól lehet a kivonási idő ezáltal megrövidül (hiszen a kivonás már a desztilláció alatt megkezdődik), az eljárás gazdaságossága több szempontból kívánni valót hagy maga után. Mindhárom eljárás közös jellemzője ezenkívül az, hogy az enzimek kivonására való előkészítése és maga a kivonási művelet is erősen savanyú vegyhatású közegben történik. Ezenkívül bizonyos eljárások, így pl. a Journal of the American Pharmaceutical Association 40. kötetének 552. oldalán Charles W. Bauer és A. John Vazakas szerzők által ismertetett módszer, inzulinmentes pankreaszfoól olyan Pankreatin port (enzimkeveréket) állít elő, amely különösen gazdag lipázíbam, azonban a mellette1 levő több; enzimet, így a tripszint sem különíti el. Jelen találmány kiküszöböli a korábbi módszerek technológiai hátrányait s olyan eljárást mutat be a tripszin insulinmentes hasnyálmirigymaradékból történő kinyerésére, amely lényegesen egyszerűbb, könnyebben kivitelezhető, s így gazdaságosabb az eddig ismerteknél. Kutatásaink során megállapítottuk, hogy a tripszinnek insulinmentes hasnyálmirigymaradékból történő egyszerű és gyors kinyeréséhez — szemben az összes eddigi közlésekkel — 1. nem szükséges a szerv alkoholtartalmának nagymérvű, alacsony szintre való csökkentése; 2. a kivonásnak s aktív enzimkészítmény nyerésének — az eddig ismert adatokkal ellentétben — nem alapfeltétele az erősen savanyú (pH 1,5—4,0) közeg alkalma-