147287. lajstromszámú szabadalom • Eljárás főként gyógyászati célra használható poliszacharidok biológiai szintézisére
2 147.287 képződésére alkalmas indítószereket tartalmaz, vagy pedig egyáltalán nem tartalmaz indítóßZiereket. A találmány szerinti lejárás kiviteli módját közelebbről az alábbi példa szemlélteti: 1. Az inokulum előállítása. Egy 500 ml-es laposfenekű lombikban kb. 1 cm vastag ágár-réteget létesítünk az alábbi összetételű táptalajokból: 0,6% íruktóz 10 % élesztőfőzet (élesztő 1 : 5 g/térf. arányú vízzel) 0,1 % pepton 0,5% Na2 HP0 4 -12H 2 0 0,1 % KCl 3 % agár, ezt az; oldatot vízzel 100%-ra egészítsük ki. Erre az ágár-lemezre egy aktív Leuconostoc mesenteroides törzset oltunk át a szokásos szacharóz-tartalmú táptalaj ró]. A kultúrát 25 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk kb. 24 óra hosszat, majd 300 ml alábbi összetételű folyékony tápoldatot öntünk az ágár-lemezre: 0,2 % propanol 10 % élesztőfőzet (élesztő 1 : 5 g/térf. arányú vízzel) 0,1 % pepton 0,5% Na2 HP0 4 -12H 2 0 0,1 % KCl, a többi víz. pH = 7. Ezt az oldatot 24 óra hosszat inkubáltatjuk 25 C° hőmérsékleten, majd 7 liter ugyanilyen összetételű tápoldatot oltunk be vele és újabb 24 óra hosszat inkubáltatjuk. 2. A szintézis lefolytatása. 63 liter steril oldathoz, amely 7 szacharózt, 2,1 kg primér-dextránt, 0,35 kg Na2 HP04 • 12H2 0-ot, 0,07 kg KCl-ot, 7 liter élesztőfőzetet (élesztő 1 : 5 g/térf. arányú vízzel) és 0.07 kg peptont tartalmaz, 7 litert adunk az 1. alatt ismertetett módon előállított inokulum-oldatból. Az elegyet addig ferment: áltatjuk 25 C° hőmérsékleten, .míg a pH 4. körüli állandó értéket nem ér el. 3. Gyógyászati célra alkalmas dextrán kinyerése. A fermentáció befejezése után az oldathoz annyi metanolt adunk, hogy metanoltartalma 40% legyen. Az ennek során képződő és leülepelő zavarosodást leszűrjük. Utána ismét metanolt adunk az oldathoz, míg a metanolkoncentráció 52%-ot A Kiadásért felel a Közgazdasá; nem ér el. Az eközben csapadékként kiváló dextránt elválasztjuk a metanolos oldattól, majd hideg vagy forró vízben oldjuk és szobahőmérsékleten megismételjük a fenti metanolos frakcionálást. A 40% és 52% metanoltartalom között kiváló frakciót hideg vagy forró' vízben oldjuk és 60—70 C° hőmérsékleten szűrjük. Az idegen ionok eltávolítása végett ioncserélő oszlopokon vezethetjük át az oldatot, azután — vagy esetleg az iontalanító művelet, mellőzésével — vákuumban eredeti térfogatának 1/3 részére pároljuk be a metanol teljes elűzése végett. Ezután a koncentrációt vízzel kb. 6%-ra állítjuk be, és kb. 0,9% kiizzított konyhasót adunk hozzá; ezzel az oldat gyógyászati célokra való. letöltésre és sterilizálásra kész. Eljárhatunk oly módon is, hogy a vákuumbepárlás után a besűrített oldatot permetszárító berendezésben teljesen beszárítjuk; így száraz por alakjában kapjuk a gyógyászati dextránt. A fent említett mennyiségekből való kiindulás esetén a hozam (száraz anyagra számítva) átlagosan 4,8 kg gyógyászati dextrán. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás gyakorlatilag egységes molekulasúlyú poliszacharidok, főként gyógyászati célokra alkalmas dextrán előállítására, különösen a Leuconostoc mesenteroides aktív törzseivel, melyre jellemző, hogy irányított biológiai szintézist indítunk el azáltal, hogy öltóteinyészeteket (inokulumot) készítünk olyan tápoldatban, amely C-forrásként csak olyan szerves vegyületeket, pl. szerves savakat és alacsony, C2 —C 4 szénatomszámú alkoholokat tartalmaz, melyek a baktérium nagyfokú virulenciáját és optimális dextrán.képző képességét biztosítják, anélkül, hogy — a maltóz-, izomaltóz- vagy szacharózsorozattal ellentétben — a dextránképződés indítószereként hatnának vagy a fermentumrendszer behatására indítószerek képződését idéznék elő, majd a keletkező oltótenyészetet indító-Bzeradalékkal vagy anélkül szacharóztartalmú színtézistápoldatba oltjuk át, ezt az oldatot a szokásos módon fermentáljuk és a fermentáció termékét ismert módon gyógyászati dextránra dolgozzuk fel. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja különféle alkalmazási célokra szolgáló polimolakuláris dextrán előállítására, azzal jellemezve, hogy az inokulumot olyan szacharózoldatba oltjuk át, amely a gyógyászati dextrán enzimes szintézisére szolgáló 'indítószerektől eltérő egyéb indítószert tartalmaz vagy pedig egyáltalán nem. tartalmaz indítószert. ;i és Jogi Könyvküldő i£?azííarőin 601797. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
