146518. lajstromszámú szabadalom • Eljárás trichothecin előállítására

2 146.518 mennyisége 205 gamma/ml. Ha a 24 órás Trichothecium fermentációra 10%-nyi mennyiségű 24 órás Penicilliuim inoculumot oltunk rá, a trichothecin átlagértéke ugyancsak a 72-ik órában 995 gamma/ml. Ha 44 órás Trichothecium tenyészetre oltottunk rá ugyancsak 10% mennyiségű 24 órás Penicillium iinoculumot, úgy az átlagérték csak csak 361 gamma/ml volt. Egy másik kísérletben tisztán csak Trichoheciummal oltott lombikokban átlag 160 gamima/ml trichothecint kaptunk 112 órás fermentálás után. A 22-ik órában történt Penicillium ráoltás esetén 616, a 74-ik órában történt ugyanolyan mennyiségű Penicillium ráoltás esetén 153 gamma/ml értékek adódtak, szintén 112 órás fermentálás után. A ráoltáSiSal kapcsolatban a mennyiségi viszonyok döntő fontosságúak. Az egyik kísérletben a Trichothecium tenyészetre ráoltott .Penicillium tenyészet mennyiségét az egyik lombikcsoportban a másikhoz viszonyítva tízszeresére emeljük, úgy az egyszeres Penicillium mennyiséggel ráoltott lombikokban a kontrollhoz viszonyítva a trichothecin mennyisége növekedett, viszont a tízszeres mennyiséggel ráoltottakban trichothecin termelés egyáltalán nem mutatkozott, hanem egy kevés penicillin termelődött. így egy kísérlet sorozatnál tiszta Trichotheciummal 400 gamma/ml trichothecin, 1% Penicillium adalék mellett 850 gamma/ /ml trichothecin, 10% Penicillium adalék mellett 0 trichothecin termelést kaptunk. Egy másik kísérlet során szintén 3—3 lombikban végeztünk párhuzamos fermentációt. Tiszta Trichotheciummal 88 órás fermentálás, után a csúcsérték 87—96—96 gamma/ml, a 24-ik órában ráoltott 2%-nyi mennyiségű Penicilliummal 115, 0, 550 gam;ma/ml 10% Penicillium ráoltás esetén 0,0,0, gamma/mi trichothecin hozamot kaptunk, ugyancsak 88 órás fermentálás után, amely a 136-ik óráig nem változott. A kritikus Penicillium inoculum mennyiség tehát itt 2% volt. A fenti kísérletből is látható, hogy 2% Penicillium alkalmazásánál bizonyos esetekben lényegesen jobb, más eseteikben pedig nem kaptunk eredményt. 10% Penicillium pedig már erősen a kritikus pont felett volt, melynél trichothecin termelést egyáltalán nem kaptunk. A kísérleteink során tehát megállapíthattuk, hogy a kvantitatív viszonyoknak igen fontos szerepük van. Mennyiségi viszonyok lehetőleg pontosabb meghatározása céljából kísérleteinkben a következőképpen jártunk el: A Trichothecium ill. a Penicillium inoculumokat meghatározott számú Trichothecium ill. Penicillium spórával oltottuk. Amidőn a spórákból kinőtt vegetatív inoculum bizonyos mennyiségével beoltottuk a fermentációs lombikot, tudtuk, hogy ez a mennyiség hány spórából nőtt ki, így tehát i 'r'.-ik azt is, hogy a rázott lombikban kinőtt Trichothecium tenyészet ill. a ráoltott Penicillium tenyészet hány spórából nőtt ki és ezt aztán bizonyos terv szerint változtattuk. A spóraszámokkal a mennyiségi viszonyokat általában jobban lehet meghatározni. A vizsgálatok csúcsértékeinek eredménye (112—136-ik órában) a következő volt: I. táblázat Trichothecium spóraszám trichothecin gamma'ml Ha a Penicillium spóraszám 1. 25,000 2. 2,500 3. 25,000 4. 2.500 5. 25,000 6. 2,500 7. 2,500 (kontroll) 503 463 300 340 300 250 600 (egy lombikban) 140,000 14,000 14,000 1,400 0 0 140,000 Az 1—2., ill. 3—4. kísérleteknél a trichothecin értékei között mutatkozó különbségek a biológiai kísérletek ismeretes hibahatárain belül vannak. E kísérletekből kitűnik, hogy egy bizonyos spóraszámból kinőtt Trichothecium tenyészethez viszonyítva, egy bizonyos, minimális mennyiségű spóraszámból kinőtt Penicillium tenyészet kell ahhoz, hogy emelje a trichothecin hozamot. Így a 3. kísérletnél a 25,000 kiindulási spóraszámú Trichothecium tenyészetet a 14,000 kiindulási spóraszámú Penicillium tenyészetből történt ráoltás — a kontrollal egybevetve — egyáltalán nem befolyásolja. Viszont ugyanaz a Penicillium spóraszám a tizedrésznyi kiindulási spóraszámú Trichothecium tenyészetnél (2. kísérlet) a trichothecin termelést erősen emelte. A 7. kísérletnél három közül két lombikban a trichothecin mennyisége 0 volt, míg egy lombikban 600 gamma/ml. Vagyis itt 2,500 kiindulási Trichothecium spóraszámú anyagnál 140,000 Peniciillium spórás anyaggal elértük a kritikus pontot. Az 1. szám kísérletnél a 25,000-es Trichothecium spóraszámú anyagnál és az előbb említett 140,000 Penicillin spóraszámnál a kritikus pont alatt voltunk, e három lombikban termelt trichothecin mennyiségei 470, 520, 520 gamma/ml volt. A mennyiségi viszonyokat könnyebb reprodukálni, ill. a fermentáció reprodukálhatóságát könynyebb elérni fermentorokban, mint rázott lombikokban. Előkísérletekhez azonban egyszerűbb és könnyebb rázott lombikokban dolgozni. Így pl. 5 literes üvegfermentorokban hasonló mennyiségű eredmények adódtak, mint a rázott lombikok esetén. Penicillium ráoltás a 24-ik órában történt, a fermentáció trichothecin csúcs értékei 112—136 óránál adódnak.