146332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a primicin fermentációs oldatokból való kinyerésére és tisztítására
4 146.332 acetátoldatot (olidószieír 80%^os metanol) adunk hozzá, a fehérjék kicsapása céljából. A leváló csapadék tömörítése céljából, az oldatot 50 C°-ra melegítjük, majd a csapadékot centrifugálással elválasztjuk. A csapadék aintibiotikus hatást alig mutat (10-szeres ihígítás). Az oldathoz az ólomacetát feleslegének eltávolítáisára 7%K)s nátniumbikairbonátoldatot adunk mindaddig, míg több ólomfcarbonát már >nem válik le. A csapadékot centrifugálással eltávolítjuk, az oldatot vákuumban besűrítjük 'és a hatóanyagot vízzel való hígítás útján kicsapjuk. A levált primicint centrifugáljuk, vízzel mossuk, majd vákuum-iszűrőn levegő-szárazra szűrjük. A fehérjéktől mentesített terméket 3 liter 00%-os metanolban melegen oldjuk, az oldatot vákuumban térfogatának l/3-á:ra sűrítjük be, majd butanollal több részletben extraháljulk. Az egyesített butanolos kivonatokat vákuumibam besűrítjük, majd 0 C%ra hűtjük: a primicin laza por alakjában válik le. 9,2 g terméket kapunk, amelynek N-tartalma 3,99%, szulfáthamuja 0,24%, olvadáspontja 180 C°. A fenti módon kapott 9,2 g terméket 6X100 ml absz. metanollal oldjuk szobahőmérsékleten. A nem oldódó részt üvegszűrőn leszűrjük, az oldatot vákuumban kis térfogatra bepáiroljuik, és a hatóanyagot butanolos oldatba visszük át. Ebből kristályosítva 7,3 g gyengén sárgás, hamumentes terméket 'kapunk, amelynek elemi •összetétele — C 58,7%, H 9,44%,, N 3,79% — a (CigH37C>7lNl)n összegképletnek felel meg. Ezt a terméket a pigmens-szeminyezés eltávolítása végett 90 C° hőmérsékleten oldjuk 1 liter butanollal telített, vízben. Ezután forrón kikeverjük 10X5 nil 1 :1 arányú butanoPbutilaeetát eleggyel. A gyengén sárgás színű szerves fázisokat óvatosan leszívatjuk, a vizes fázis teljesen színtelenné válik. Ezután a primicint melegen át rázzuk tiszta 'butanolba és kikristályosítj uk. 6,2 g 'hófehér színű, laza, mikrokristályos végterméket kapunk, amelynek elemzési adatai nem különböznek a fentebbiektől, olvadáspontja 180 C°. 2. példa: ' 120 liter fermentációs levet ellenáramiban 3X20 liter ibutanollal emuigálunk, majd szétválasztjuk a két fázist, A sárgás színű 'butansolcs kivonatokat egyesítjük és válkuumibain eredeti térfogatának egytizedéire bepároljuk. Az eközbein kivált inaktív anyagokat eltávolítjuk, az oldatot még tovább pároljuk be, majd ötszörös térfogatú éter hozzáadásával kicsapjuk a hatóanyagot, centrifugáljuk és vákuumban megszárítjuk, 15,5 g nyers hatóanyagot kapunk, amely egyéb szennyezések mellett még 31%: liipoidot- tartalmaz, amelyet' acetonnal történő extrahálás útján távolítunk el. Á nyers primicin további tisztítása az 1. példa szerinti módon történik. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a primicmi fermentációs levekiből való kinyerésére és tisztítására, amelyre jellemző, hogy a fermentációs levet vízzel nem keveredő alkohollal extriahalj.uk , az alkoholos kivonatból a nyers primicint bepárlás és/vagy Mcsapás útján kinyerjük, majd a primicint nem oldó szerves oldószerrel kivonjuk ibelőle a üpciidokat, a primicin vízzel keveredő alkoholos oldatból vízzel történő lecsapása útján távolítjuk el a víziben oldható szennyezéseket, a fehérjéket pedig ammonias alkoholos oldatból ólomacetáttal csapjuk le a primicin mellől. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző,, thogy a primicinnek a fermentációs léből való kivonására normál és/vagy izoibutilalkoholt alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a primicinnek a fermentációs lé fcivonatolására alkalmazott vízzel nem keveredő alkoholból való kicsiapását és a lipoidok eltávolítását egy műveletben végezzük oly módon, hogy a — célszerűen besűrített — alkoholos kivonathoz a pnkniciint nem oldd lipoidoldótszert, pl. acetont, kloroformot vagy etilacetátot keverünk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás változata, melyre jellemző, hogy a primicint a fermentációs lében jelenlevő fehérjék megsavanyítás vagy kisózás latján történő kicsa pasával, a csapadékon adszorbeált állapotban nyerjük kii a fermentációs léiből, majd a primicint — célszerűen a lipoidok acetonos kivonással történő eltávolítása után — vízzel keveredő alkohollal áldjuk le a fehérje-csapadékiról és ezt az oldatot alkalmazzuk a további tisztítási műveletek kiinduló anyagaként. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a primicint adszorbeáló fehérje-csapadékhoz valamely semleges lazítóanyagot (pl. fűrészpor, cellulózpor) keverünk és ezzel együtt különítjük el a csapadékot, célszerűen cenitrifugáliással, a fermentációs létől. 6. Az 1—5. igénypointck bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a vízben oldódó szennyezéseket a tisztítandó primicin vízzel keveredő alkoholban — célszerűen forró metanolban — történő oldása, az oldat bssűrítése és a primicinnek a besűrített alkoholos oldatból hideg víz hozzáadásával történő kicsapása útján távolítjuk: el. 7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző,, hogy az alkoholban oldható fehérjéket a tisztítandó primicin ammóniával meglúgosított alkoholos pl. metanolos, etanolos vagy vízzel telített butanolos oldatából alkoholban oldható ólomsó vagy higanysó —• célszerűen alkoholban oldott ólomacetát — hozzáadása útján választjuk el. 8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy-a primicin pigmensMSzennyezéseit a primicin vízzel nem keveredő alkohollal, pl, butanollal telített vizes oldatának vízzel nem elegyedő alkohol és észter (pl. butanol és butilaoetát) elegyével történő kivonatolása útján távolítjuk el a primicin. mellől.
