146332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a primicin fermentációs oldatokból való kinyerésére és tisztítására
2 146.332 oldódó szennyezésekéit a termék vízzel elegyedő szerves oldószerben való oldása és a primíicin vízzel történő .kicsiapása útján távolítjuk el. Az alkoholckbain oldódó fehérjéiket ammóniás alkoholos közegben alkoholban oldható ólomsóval vagy higanysoval, célszerűéin ólomacetáttal választjuk le az oldatban maradó primicin mellől. A pigmemsek eltávolítása vízzel nem keveredő alkohollal telített vizes oldatban, vízzel nem keveredő alkohol és észter eleigyével való extrakeió útján történik. A primiicinhez kötődő nehezen oldódó szennyezéseket frakcionáló oldószeres oldással különítjük el a tiszta hajtóanyagtól. Végül a tiszta hatóanyagot forrón telített alkoholos, esetleg jégecétes, piridines vagy dioxános oldatból kristályosítjuk át. majd a hideg, nedves fcristálytömeget '— gyantás, üvegszem termék képződésének elkerülése érdekében — a priniiicint nem oldó szerves oldószerrel mossuk és vákuumban szárítjuk. A tiszta ^primieinnek a fermentációs termékből való kinyerését lehetővé tevő fenti műveletek adott esetben a fentitől eltér; sorrendben, vagy a feldolgozandó nyerstermék természetétől függően egyes műveleti lépések elhagyásával is alkalmazhatók; így e műveletek nemcsak összességükben képezik a jelen találmány tárgyát, hanem önmagukban való- újszerűségük folytán az igénypontok által meghatározott terjedelemben külön-külön ds. A találmány szerinti eljárás, valamint ennek keretében az egyes műveletek célszerű gyakorlati kiviteli módja a következő: Csapadékos adszorpció. A nyers fermentációs levet, amelynek pH-értéke a fermentáció befejeztekor 8 körül van, ásványi vagy szerves savval megsavanyítjuk. s Ennek hatására a fermentációs lében jelenlevő tetemes mennyiségű fehérje pelyhes csapadék alakjában kiválik és e csapadék a felületén adszorbeálva magával ragadja a fermentációs lében levő primicint is.' A primiicint is adszorbeáló fehérje lecsapása végezhető megsavanyítás helyett kisózás pl. ammóniumszulfát vagy nehézfémsók hozzáadása útján is. A primtieint is tartalmazó ismert módszerek, pl. ülepítéssel egybekötött folyamatos centrifugálása vagy szűrés útján különítjük el a létől. A csapadék jobb kezelhetősége érdekében előnyös, ha annak elkülönítése előtt lazító anyagokat (pl. cellulózpor, fűrészpor, kovaföld) keverünk hozzá; ezek nem. vagy alig kötnek meg primicint. de nagy felületük révén megkönnyítik a továbbfeldolgozás során a primieinnek a csapadékból való kioldását. A csapadék továbíbfeldolgozása történhet' közvetlenül friss, nedves állapotban, vagy pedig vákuumban vagy légáramban (történő szárítás után is. A fermentációs lé közvetlen extrakciója. A fent leírt csapadékos adszorpciós módszerrel széniben számottevő előnyöket mutat a primieinnek a fermentációs lé közvetlen extrakcióján alapuló kinyerési módja, amely egyszerűbb technológiával nagyobb tisztaságú terméket ad. A fermentációs levet a gomba micélurnáinak kellő mértékű lízise után, szűrés nélkül, vízzel nem keveredő és a primicint jól oldódó oldószerrel extrahálj ük, előnyösen folytonos ellenáramú extrakciós módszerrel. Oldószerként tapasztala'taihk szerint a vízzel nem keveredő alkoholok (n-ibutil-, izabutil-, amilaifcöhol) alkalmazhatók a legelőnyösebben. Emulgálószert tapasztalataink szerint nem szükséges alkalmazni. Az extrakeió során létrejövő emulziót folyiticinos működésű szeparátorok alkalmazásával, esetleg a közeg megsavanyításával segíthetjük elő; savanyú közegben a primicin megoszlási hányadosa ás kedvezőbb. A fázislhatáron esetleg kicsapódó fehérje is tartalmazhat hatóanyagot, ezért nagyobb mennyiségű kiválás 'esetén célszerű ezt a csapadékot a szeparátorból való eltávolítás után bármilyen alkohollal extrahálmi és az extraktumot is. hozzáadni a feldolgozandó oldathoz. A hatóanyagot tartalmazó alkoholos fázist vákuumban kis térfogatra, pároljuk be, majd ebből a hatóanyagot valamely, a primicint nem oldó szerves oldószer (éter. etilacetát, aceton, kloroform stb.) hozzákeverése útján csapjuk ki. Történhet a szilárd nyers hatóanyag kinyerése közvetlen Vákuum^bepárlás útján. is. A lipoidok eltávolítása. A fentebb leírt kétféle kinyerési eljárás valamelyikével kapott nyers, nedves vagy szárított sziilárd terméket a jelenlevő lipoidok eltávolítása céljaiból a primicint nem oldó szerves lipoid-oldószerrel (aceton, éter, etilacetát, kloroform) extnaháljuk. Az extrakciót előnyösen forrón, pl. Soxleth-rendszerű készülékben végezhetjük. Ha a nyers primicin alkoholos oldatban kerül feldolgozásra,, miint a fentebb leírt alkoholos extrakciós eljárással kapott besűrített extraktum esetében, akkor az itt említett oldószereknek az alkoholos oldathoz való hozzákeverése útján történő hatóanyag-leválasztás sarán egyúttal megtörténik a lipoidok eltávolítása is: ezek a szerves oldószerkeverékben oldva maradnak, míg a primicin lipo időktől mentes állapotban válik le. Az ily módon levált lipoidmentes primicint azután szűrés vagy oentrifugálás útján különítjük el a folyadékfázistól, mossuk és szárítjuk, vagy nedves állapotban dolgozzuk fel tovább. A vízben oldható szennyezések eltávolítása. Az előző feldolgozási műveletből származó nedves vagy megszárított nyersterméket alacsony forrpontú alkoholokkal (metanol, etanol) extraháljuk. Ezt az extrakciót célszerű melegen végezni, pl. folyamatos diffuziiiós rendszerrel. Növeli a primicin extrakciójámak hatásfokát, ha az oldószerként alkalmazott alkoholt, pl. sósavval vagy jégecettel megsaivanyítjuk. Hasznosítható ennek az extrakciónak a során az a felismerésünk is, hogy a primicint önmagáiban nem oldó aceton 10—40% víztartalom esetén jól oldja a primicint, így ilyen víztartalmú acetont is alkalmazhatunk oldószer- -kernt. Adhatunk az oldószerhez még az oldóképességet növelő adalékokat, pl. szorbit-monooleátot vagy p^toluolszulfosavat is. Az oldószeres kivonatot ezután — célszerűen vákuum alatt — kis térfogatra pároljuk be. Ha eközben 'erős habzás lépne fel, ezt szilikon-olaj hozzáadásával szüntethetjük meg; a hahzásgátlószert azután szénteitrakloriddal távolítjuk el. A besűrített oldószeres kivonatot vízzel felhígítjuk,
