146091. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biosztintétikus készítmények termelési hozamának megnövelésére
Megjelent: 1960. január 15. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 146.091. SZÁM 12. p. OSZTÁLY — VU—19. ALAPSZÁM Eljárás bioszintetikus készítmények termelési hozamának megnövelésére Vyzkumny ústav antibiotik, Roztoky (Praha mellett), Csehszlovákia A bejelentés napja: 1958. január 30. Csehszlovákiai elsőbbsége: 1957. január 31. A fermentációs eljárások fontossága, mind a vegyi és gyógyszeriparban, mind az élelmiszer- és mezőgazdasági iparban való alkalmazásuk révén egyre inkább növekszik. Az utóbbi időben számos fontos ipari üzem létesült különféle termékek fermentáció útján történő előállítására. A fermentációs eljárás gazdaságos volta közvetlenül függ attól, hogy a bioszintetikus termék milyen hozamát sikerül a fermentációs oldat térfogategységére számítva biztosítani. Ezért általános törekvés nyilvánul meg a fermentációs eljárások termelékenységének megnövelésére. Az utóbbi évek folyamán számos javítást vezettek be a fermentációs technikában. Rátértek nemesített mikroorganizmus-törzsek felhasználására és a bioszintetikus termékek ún. prekurzorainak az alkalmazására; a fermentációs technika ilyen tökéletesítései révén sikerült is általában megnövelni a bioszintetikus termékek hozamát. Ezáltal csökkenteni tudták a gyártási költségeket és így lehetővé vált a fermentáció útján nyert bioszintetikus termékek felhasználása a legkülönfélébb ipari alkalmazási területeken. Azt találtuk, hogy az ilyen bioszintetikus termékek hozama még jobban megnövelhető megfelelő serkentőanyagok alkalmazása útján; a jelen találmány tárgyát a bioszintetikus készítmények termelésének ilyen serkentési eljárása képezi. A találmány értelmében bizonyos kéntartalmú vegyületek kerülnek e célra alkalmazásra. E serkentőszereknek a fermentációs tápoldatban alkalmazásra kerülő optimális koncentrációja olyan csekély, hogy nem lehet őket a bioszintetikus termék „prekurzorainak" (előtermékeinek) tekinteni. Az olyan kéntartalmú szerves vegyületek esetében tapasztaltunk ilyen serkentő hatást, amelyek R —Xi vagy R —X —R] általános képlettel jellemezhetők, ahol R és Rí valamely alifás, aromás, heterociklusos gyök vagy ilyen csoportok kombinációjából álló gyök lehet, X pedig —SCN, —CNS, vagy —SH csoportot, Xi pedig —S-t jelent. A találmány értelmében ezeket a serkentőszere-Jset 50 mcg/ml alatti koncentrációban adjuk a fermentációs tápoldathoz. A serkentőszer hozzáadása történhet egy adagban a fermentáció kezdetén, történhet azonban fokozatosan, kisebb adagokban a fermentáció folyamán is. A fermentáció lefolyása egyébként alig tér el az eddig általában alkalmazott szokásos eljárásmódtól. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitelét az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: A termelési hozam megnövelése klórtetraciklin Streptomyces aureofaciens törzs felhasználásával történő termelése során. A 80 ml térfogatú tápoldat a következő anyagokat tartalmazza: szaccharóz (3%), zsírtalanított szójaliszt . (2%), NaCl (0,5%), CaCOs (0,4%), (NH4 ) 2 S0 4 (0,2%), melasz (0,2%), 50%-os kukoricalekvár (0,5%). Ehhez a fermentációs tápoldathoz 0,8 ml 100 mcg/ml koncentrációjú steril vizes benzilszulfocianid-oldatot adunk, ami az egész tápoldatra számítva 1 mcg/ml benzilszulfocianidkoncentrációnak felel meg. Ezután a tápoldatot beoltjuk 4 ml inokulummal (termelőképes Streptomyces aureofaciens törzs 24 órás kultúrája). A fermentációt rázóasztalon folytatjuk le, 96 óra hosszat, 28 C° hőmérsékleten. Párhuzamosan ellenőrző fermentációs kísérletet végzünk ugyanilyen módon, de benzilszulfocianid hozzáadása nélkül. A benzilszulfocianid-adalékkal lefolytatott fermentáció során kapott fermentációs lében a klórtetraciklin hozama 200%, az ellenőrző kísérlet során kapott hozamhoz viszonyítva. 2. példa: A termelési hozam megnövelése oxitetraciklin Streptomyces rimosus törzs felhasználásával történő termelése során. 80 ml szokásos összetételű tápoldathoz 4 ml 100 mcg/ml koncentrációjú steril dibenzilszulfidoldatot adunk, ami az egész, tápoldatra számítva 5 mcg/ml koncentrációnak felel meg. A tápoldatot ezután beoltjuk 4 ml szokásos módon elkészített Streptomyces rimosus inokulummal. A fermentá-
